溫膽湯改良方含藥腦脊液對Alzheimer病細胞模型作用的實驗研究.pdf

1、本文從中醫(yī)經(jīng)典古籍入手，對歷代重要醫(yī)籍有關癡呆的文獻進行了整理研究，從病名沿革、病因病機和防治方藥等方面梳理其學術發(fā)展脈絡，并重點闡述了老年性癡呆與痰邪致病之間的關系，提出了“以腎虛為主的五臟虛衰是老年性癡呆發(fā)生的內(nèi)在機理，痰邪致病是老年性癡呆發(fā)病的關鍵所在”的癡呆發(fā)病觀，并由此提出了補腎填精，化痰開竅的癡呆治療法則。同時論述了以治痰良方溫膽湯為基礎的溫膽湯改良方補腎填精，益髓充腦，祛痰化濁，開竅益智的作用原理。研究內(nèi)容： 本課

2、題初步探討在可溶性AB25-35片斷誘導的NG108-15細胞建立的AD模型，運用腦脊液藥理學的方法，觀察溫膽湯改良方含藥腦脊液及含藥血清對AD細胞模型凋亡及凋亡相關蛋白bcl-2、bax表達的影響。進一步分析溫膽湯改良方對老年性癡呆的可能作用機理。 方法：以預先“老化”處理的5μmol/L的AB25-35片斷誘導NG108-15細胞建立AD細胞模型，實驗分空白組、模型組、空白腦脊液組、含藥腦脊液組、空白血清組、含藥血清組。以溫

3、膽湯改良方含藥腦脊液和含藥血清分別作用于各組NG108-15細胞，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及其生長狀況并攝片；MTT法檢測細胞活性；流式細胞術檢測細胞凋亡；SABC免疫組化檢測凋亡相關蛋白bcl-2、bax的表達。 結果：1.對細胞形態(tài)的影響細胞在無Aβ25-35的空白組生長背景清晰，細胞增長良好。在Aβ蛋白片斷神經(jīng)毒性作用下，其余各組細胞生長背景不良，可見若干死亡細胞和細胞碎片漂浮，NG108-15細胞數(shù)目明顯減少，多積聚

4、成簇狀，大部分神經(jīng)元胞體縮小，胞漿較暗淡，有斑點，有較多細胞脫壁漂浮現(xiàn)象，有突起伸出的神經(jīng)細胞明顯減少。與空白組比較，其余各組有突起細胞比率減少(p＜0.05)；含藥血清組和含藥腦脊液組與模型組比較，細胞突起率均增加，其差異有顯著性(p＜0.05)。 2.對細胞活性的影響MTT法檢測細胞存活率，與空白組比較，模型組、空白血清組及空白腦脊液組OD值降低(p＜0.05)；含藥血清組和含藥腦脊液組OD值高于模型組(p＜0.05)；含藥

5、腦脊液組比較于含藥血清組，其OD值有升高趨勢，但無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。 3.對細胞凋亡的影響與空白組比較，有Aβ25-35作用的各組，其細胞凋亡率均升高，其中除含藥腦脊液組外，其余各組有極顯著性升高(p＜0.01)；與模型組比較，含藥腦脊液和含藥血清組細胞凋亡率均減少(p＜0.01)，且含藥腦脊液組神經(jīng)元凋亡率小于含藥血清組(p＜0.05)。 4.對凋亡相關基因Bcl-2、Bax蛋白表達的影響與空白組比較，有Aβ

6、25-35作用的各組Bcl-2表達下降，而Bax的表達升高(p＜0.05)；與模型組比較，各血清組和腦脊液組神經(jīng)元Bcl-2陽性表達數(shù)無顯著性差異(p＞0.05)，而含藥腦脊液組和合藥血清組Bax的表達降低(p＜0.05)，Bcl-2/Bax比值升高。兩組間比較無顯著性差異(p＞0.05)。 結論：1.“老化”的Aβ25-35片段可損傷體外培養(yǎng)的NG108-15細胞，誘導細胞凋亡，使Bcl-2蛋白表達下降，而Bax的表達升高，在