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文檔簡介
1、目的:研究骨髓間充質干細胞D1和成骨細胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14在基底應變作用下NMDA型谷氨酸受體(NMDAR)的表達情況,探討NMDAR在成骨細胞力學信號轉導的作用和相關的信號通路。 方法:采用RT-PCR技術,免疫熒光染色技術,蛋白免疫印跡技術和體外細胞循環(huán)拉伸基底應變刺激的方法,鑒定在骨髓間充質干細胞D1和成骨細胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14細胞系中NMDA
2、R的表達情況,研究MC3T3-E1 subclorle 14細胞的力學響應;利用NMDAR非競爭性抑制劑MK801、細胞外鈣離子內流信號阻斷劑EGTA、細胞微絲骨架阻斷劑細胞松弛素D單獨應用和聯(lián)合應用的方法,以RT-PCR、WESTERN-BLOT技術研究NMDAR參與力學信號轉導的作用和相關的信號通路。 結果:骨髓間充質干細胞D1和成骨細胞。MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14三個細胞系均表達NMDAR必
3、須亞基1(NR1)和不同的亞基2(NR2A-D);轉錄因子AP-1、CBFA1/RUNX2參與了力學信號轉導的信號通路;阻斷NMDAR,阻斷細胞外鈣離子內流,阻斷細胞微絲骨架,都分別部分的抑制了力學刺激誘導的ERK1/2信號通路的激活,而分別聯(lián)合應用MK801+EGTA、MK801+CYTO D阻斷劑時則都基本抑制了力學刺激誘導的ERK1/2信號通路的激活。 結論:NMDAR在成骨細胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subc
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