Mono基因向棉花基因組的導入及其對棉花發(fā)育的影響.pdf

1、棉花是我國重要的經(jīng)濟作物，也是我國引種最為成功的外來物種。由于我國棉花種質資源匱乏，采用常規(guī)雜交育種方法，很難培育出在農藝性狀和經(jīng)濟性狀方面有突破性的新品種。采用轉基因技術，將有重要經(jīng)濟利用價值的外源基因導入栽培的陸地棉基因組中，是培育棉花新品種和創(chuàng)造育種新材料的一條有效途徑。本研究利用棉花莖尖為外植體，通過農桿菌介導的轉基因技術，將生長素合成有關的單加氧酶基因(mono)導入陸地棉基因組，以期培育出豐產、優(yōu)質、早熟、雄性不育等棉花新品

2、種或新材料。 本研究取得的主要實驗結果如下：1.以發(fā)芽5-8d的棉花無菌苗莖尖為外植體，在0.8-1.2OD的農桿菌中浸染15min后，經(jīng)過2d共培養(yǎng)轉入含Km的選擇培養(yǎng)基上進行篩選，三種不同的轉化結構均獲得了抗性苗。在選擇培養(yǎng)基上進行Km抗性試驗表明：通過延長篩選時間，30mg/L的Km可以起到良好的選擇作用，100mg/L的Cef可以較好地抑制細菌生長。 2.本研究共轉化了3000多個莖尖，通過嫁接方法對轉化后的Km

3、抗性再生苗進行定植，成活率達到13.9％-72.2％，通過此方法共獲得117株田間成活的再生苗。經(jīng)PCR鑒定其中82株呈陽性，用Southern雜交隨機檢測了其中7個轉基因單株，6株呈陽性，證明外源基因已整合到棉花基因組中。 3.對¨代轉基因植株進行PCR檢測，PCR陽性率為21.4％-78.9％，說明轉基因當代所獲得的植株部分為嵌合體。 4.對部分T0代轉基因植株進行GUS檢測發(fā)現(xiàn)，根組織中有明顯的藍色斑點出現(xiàn)，陽性率

4、為50％。 5.部分當代轉基因植株的生育特性與對照植株相比有較大差異，7株苗期出現(xiàn)短時間的葉皺縮；6株特早熟；16株營養(yǎng)生長旺盛；2株節(jié)間縮短等性狀。當代植株的脫落率與對照相比顯著降低，經(jīng)濟性狀有改良趨勢。 6.轉基因T1代生育特性未出現(xiàn)明顯的分離。與對照相比，除株高普遍偏矮，其他生育性狀無明顯差異。 7.轉基因植株的當代及子代進行花粉育性的觀察發(fā)現(xiàn)：高溫季節(jié)雄性不育現(xiàn)象明顯，不育植株的雄蕊干癟或退化，經(jīng)醋酸洋紅