松杉靈芝多糖的發(fā)酵和提取條件優(yōu)化及抗氧化活性研究.pdf

1、靈芝多糖是一種非常重要的活性多糖，具有抗氧化、提高機(jī)體免疫力、抑制腫瘤生長、降血糖、降血脂等多種藥用活性和保健功能。本文以松杉靈芝[Ganoderma tsugae Murril]為研究對象，進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化、菌絲體多糖提取條件優(yōu)化，并對提取純化的多糖進(jìn)行體外抗氧化研究。主要研究結(jié)果如下：
　　1、對松杉靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)表明：玉米粉為最佳碳源，麥麩為最佳氮源，添加無機(jī)鹽后更利于松杉靈芝菌絲

2、體生長。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果：玉米粉5％、麥麩0.3%，KH2P040.05%，MgSO4·7H2O0.05%為最佳培養(yǎng)基配方。在最優(yōu)條件下，搖瓶發(fā)酵松杉靈芝胞外多糖的得率為0.873 g·L-1，生物量為3.043 g·L-1。確定最佳培養(yǎng)條件：最佳初始pH6，最佳裝液量為250ml三角瓶中裝液量80 ml，最佳發(fā)酵時(shí)間為6 d，最佳搖瓶轉(zhuǎn)數(shù)為150 r·min-1，最佳接種量為10%，最佳接種齡為6 d。
　　2、以菌絲體為材料，利用

3、熱水浸提法提取菌絲體多糖，以多糖得率為考察指標(biāo)，進(jìn)行提取溫度、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)四因素對松杉靈芝菌絲體多糖得率影響的單因素實(shí)驗(yàn)研究，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行四因素三水平L9（34）的正交實(shí)驗(yàn)，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：四因素對多糖得率影響的主次順序?yàn)樘崛囟龋玖弦罕龋咎崛r(shí)間＞提取次數(shù)，菌絲體多糖的最佳提取工藝為提取溫度100℃，提取時(shí)間2 h，料液比為1:30，提取1次即可。根據(jù)最優(yōu)條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測得菌絲體多糖的提取

4、率為3.145%。
　　3、分別采用Sevage法對松杉靈芝液體發(fā)酵胞外多糖進(jìn)行脫蛋白處理，D101大孔樹脂對多糖進(jìn)行脫色，然后對多糖初步純化品上Cellulose DE-52纖維素柱層析分離，分別用超純水、0.1-1.0mol·L-1NaCl進(jìn)行梯度洗脫。共分出四個(gè)組分：GT-1、GT-2、GT-3、GT-4。對GT-1、GT-2進(jìn)行紅外光譜分析：組分GT-1具有多糖的特征吸收峰，是一種由α-D-吡喃葡萄糖組成的多糖；GT-2也

5、具有多糖的特征吸收峰，能確定是多糖，但圖不夠清晰，不能判斷糖苷鍵類型。
　　4、對松杉靈芝多糖的初步純化品進(jìn)行還原力、清除DPPH·自由基、清除·OH自由基的能力、去除超氧陰離子能力進(jìn)行研究，探討其抗氧化性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：松杉靈芝胞內(nèi)和胞外多糖都具有一定的還原力，但還原能力較弱；松杉靈芝多糖可以清除部分DPPH·自由基，其清除能力隨多糖濃度的增加而增大。在多糖濃度為10 mg·ml-1時(shí)，胞內(nèi)多糖和胞外多糖對DPPH·自由基的清除率