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文檔簡介
1、靈芝多糖是一種非常重要的活性多糖,具有抗氧化、提高機體免疫力、抑制腫瘤生長、降血糖、降血脂等多種藥用活性和保健功能。本文以松杉靈芝[Ganoderma tsugae Murril]為研究對象,進行液體發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化、菌絲體多糖提取條件優(yōu)化,并對提取純化的多糖進行體外抗氧化研究。主要研究結果如下:
1、對松杉靈芝液體發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進行研究,實驗表明:玉米粉為最佳碳源,麥麩為最佳氮源,添加無機鹽后更利于松杉靈芝菌絲
2、體生長。正交實驗結果:玉米粉5%、麥麩0.3%,KH2P040.05%,MgSO4·7H2O0.05%為最佳培養(yǎng)基配方。在最優(yōu)條件下,搖瓶發(fā)酵松杉靈芝胞外多糖的得率為0.873 g·L-1,生物量為3.043 g·L-1。確定最佳培養(yǎng)條件:最佳初始pH6,最佳裝液量為250ml三角瓶中裝液量80 ml,最佳發(fā)酵時間為6 d,最佳搖瓶轉數為150 r·min-1,最佳接種量為10%,最佳接種齡為6 d。
2、以菌絲體為材料,利用
3、熱水浸提法提取菌絲體多糖,以多糖得率為考察指標,進行提取溫度、提取時間、料液比、提取次數四因素對松杉靈芝菌絲體多糖得率影響的單因素實驗研究,在單因素實驗的基礎上進行四因素三水平L9(34)的正交實驗,對實驗結果進行極差分析。實驗結果為:四因素對多糖得率影響的主次順序為提取溫度>料液比>提取時間>提取次數,菌絲體多糖的最佳提取工藝為提取溫度100℃,提取時間2 h,料液比為1:30,提取1次即可。根據最優(yōu)條件進行實驗,測得菌絲體多糖的提取
4、率為3.145%。
3、分別采用Sevage法對松杉靈芝液體發(fā)酵胞外多糖進行脫蛋白處理,D101大孔樹脂對多糖進行脫色,然后對多糖初步純化品上Cellulose DE-52纖維素柱層析分離,分別用超純水、0.1-1.0mol·L-1NaCl進行梯度洗脫。共分出四個組分:GT-1、GT-2、GT-3、GT-4。對GT-1、GT-2進行紅外光譜分析:組分GT-1具有多糖的特征吸收峰,是一種由α-D-吡喃葡萄糖組成的多糖;GT-2也
5、具有多糖的特征吸收峰,能確定是多糖,但圖不夠清晰,不能判斷糖苷鍵類型。
4、對松杉靈芝多糖的初步純化品進行還原力、清除DPPH·自由基、清除·OH自由基的能力、去除超氧陰離子能力進行研究,探討其抗氧化性。實驗結果為:松杉靈芝胞內和胞外多糖都具有一定的還原力,但還原能力較弱;松杉靈芝多糖可以清除部分DPPH·自由基,其清除能力隨多糖濃度的增加而增大。在多糖濃度為10 mg·ml-1時,胞內多糖和胞外多糖對DPPH·自由基的清除率
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