黃芪桂枝五物湯對奧沙利鉑致神經病理性疼痛大鼠鈉離子通道蛋白及基因表達的影響.pdf

1、目的：本實驗通過觀察化療藥誘導的神經病理性疼痛模型大鼠的疼痛行為學的變化、體重的變化、背根神經節(jié)的細胞病理形態(tài)學的改變及背根神經節(jié)鈉離子通道亞型Nav1.7蛋白及Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9基因的變化，探討中藥湯劑黃芪桂枝五物湯對奧沙利鉑致周圍神經病理性疼痛大鼠的治療作用及其可能的機制。
　　方法：選取45只成年的雄性WISTAR大鼠，并適應性的喂養(yǎng)7天后，進行隨機地分為三組，空白組、模型組及中藥黃芪桂枝五物湯高劑量組

2、。除空白組(n=15)予以腹腔內注射5％的葡萄糖注射液2ml/kg外，其余2組(n=15)均按2ml/kg的劑量給予腹腔內注射奧沙利鉑，2次/周。同時空白組及模型組給予0.9％的NaCl溶液進行灌胃(2ml/次)，1次/日;中藥黃芪桂枝五物湯高劑量組則予中藥煎劑(10ml/kg)灌胃，1次/日。奧沙利鉑注射的當天，中藥在奧沙利鉑注射前1小時內灌胃。持續(xù)給藥至d25。每周注射奧沙利鉑前予以稱體重并測量機械疼痛閾值及冷痛覺丙酮實驗，注射奧沙

3、利鉑后第二天再次檢測冷痛覺丙酮實驗，并每天觀察大鼠的給藥后反應、大便及飲食。D26解剖大鼠，予以心臟灌注，并摘取雙側的坐骨神經、L4-5背根神經節(jié)，行如下檢測:1、通過病理尼氏染色光鏡下觀察大鼠L4-5背根神經節(jié)的病理形態(tài)學變化，并測量大鼠的背根神經節(jié)細胞的核仁大小變化;2、用免疫組織化學法檢測各組大鼠背根神經節(jié)細胞膜蛋白Nav1.7的表達變化;3、用Western-blot的方法檢測各組大鼠背根神經節(jié)細胞膜蛋白Nav1.7的表達變化;

4、4、用RT-PCR及qPCR的方法檢測各組大鼠背根神經節(jié)鈉離子通道Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9三個亞型的基因水平變化。
　　結果：通過對大鼠的機械疼痛閾值、冷痛覺丙酮實驗等疼痛行為學和組織病理形態(tài)學的檢測證實了慢性周圍神經病理性疼痛模型的成功制備。與空白組相比，模型組大鼠的體重明顯下降，其變化具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。從機械疼痛閾值的變化趨勢來看，與空白組相比，從第14天開始模型組出現(xiàn)了明顯的機械刺激痛，機械痛覺

5、閾值明顯下降(P＜0.01)，并隨著奧沙利鉑使用周期的延長趨勢越明顯;與模型組相比，黃芪桂枝五物湯高劑量組明顯延緩了疼痛閾值的下降(P＜0.01)。從丙酮實驗的結果來看，模型組從第4天開始，即注射奧沙利鉑后2天開始，就出現(xiàn)丙酮冷刺激后的舔足或縮足，與空白組相比，模型組縮足或舔足次數明顯增加(P＜0.01)，而中藥組也減少了縮足或舔足的次數，但無具有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。尼氏染色的結果來看，與空白組相比，模型組的背根神經節(jié)的細胞尼氏

6、體明顯淡染，結構紊亂，切核仁的體積縮小(P＜0.01)，黃芪桂枝五物湯高劑量組與模型組的相比同樣也有明顯的變化(P＜0.01)。免疫組化、WB及qPCR的結果顯示，與空白組相比，模型組大鼠的背根神經節(jié)鈉離子通道亞型Nav1.7蛋白及基因的表達明顯增加，黃芪桂枝五物湯高劑量組能夠下調使用奧沙利鉑后Nav1.7的升高。qPCR的結果顯示，與空白組相比，模型組大鼠的背根神經節(jié)細胞Nav1.8、Nav1.9的mRNA表達水平均升高;與模型組相比