碘酸鈉致視網(wǎng)膜感光細胞變性機制的研究.pdf

1、目的:研究碘酸鈉對神經(jīng)視網(wǎng)膜感光細胞的作用并探討碘酸鈉引起感光細胞變性的機制。
　　方法:成年18-20g C57BL/6J小鼠腹腔注射50mg/kg碘酸鈉建立RP模型，分別在注射后6h、12h、1d、3d、5d和7d處死動物，取視網(wǎng)膜組織進行檢查，以正常小鼠作為對照。HE染色觀察視網(wǎng)膜組織的形態(tài);透射電鏡觀察視網(wǎng)膜細胞的超微結(jié)構(gòu);免疫組織化學染色檢測神經(jīng)視網(wǎng)膜中視細胞功能蛋白OPSD的表達;DHE染色檢測視網(wǎng)膜組織ROS水平;T

2、UNEL染色檢測視網(wǎng)膜中細胞的凋亡。以Western Blot檢測視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細胞中RPE65、RLBP1，神經(jīng)視網(wǎng)膜中NOX4、Nrf2、NQO1、5-lipoxygenase和caspase3蛋白表達的變化。以qRT-PCR檢測RPE細胞中RPE65、RLBP1，神經(jīng)視網(wǎng)膜中OPSD、NOX4的mRNA的表達變化。分別用PBS、不同濃度的碘酸鈉、apocynin(NOX抑制劑，10u M)作用于視網(wǎng)膜感光細胞系661W細

3、胞，24h后分別以MTS檢測661W細胞的活性，Western Blot和qRT-PCR檢測661W細胞的NOX4表達變化，TUNEL染色檢測661W細胞的凋亡情況。
　　結(jié)果:碘酸鈉注射后小鼠神經(jīng)視網(wǎng)膜與RPE同時出現(xiàn)形態(tài)變化。正常小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)清楚，各層排列規(guī)則。碘酸鈉注射后，6h時，小鼠RPE及神經(jīng)視網(wǎng)膜外核層的形態(tài)出現(xiàn)輕微變化，RPE細胞核染色質(zhì)聚集，感光細胞內(nèi)節(jié)腫脹;12h時，RPE細胞的變化與6h相似，感光細胞內(nèi)節(jié)出現(xiàn)

4、許多空泡;1d時，RPE細胞核消失，感光細胞外節(jié)嚴重水腫，片層結(jié)構(gòu)消失，內(nèi)節(jié)嚴重破壞，結(jié)構(gòu)紊亂，外核層出現(xiàn)核固縮細胞核，細胞核之間空隙增大，排列松散;3d時，RPE細胞層明顯變薄;5d時RPE細胞層結(jié)構(gòu)破壞，感光細胞內(nèi)外節(jié)結(jié)構(gòu)破壞，外核層細胞核排列紊亂;7d時RPE層及視網(wǎng)膜外核層的形態(tài)變化更加顯著，RPE層細胞被完全破壞，視網(wǎng)膜外核層結(jié)構(gòu)紊亂更加明顯。與正常小鼠視網(wǎng)膜組織相比，碘酸鈉注射后小鼠的RPE中RPE65的表達水平在6h及12

5、h時顯著高于正常對照組，1d時恢復到正常水平，1d以后逐漸下降;RLBP1在碘酸鈉注射后6h及12h時表達有輕微的升高，1d以后明顯下降。神經(jīng)視網(wǎng)膜中的OPSD表達從6h至7d逐漸減少。NOX4的mRNA和蛋白表達從6h至7d均顯著高于正常視網(wǎng)膜，以6h和12h最為明顯;ROS的水平顯著升高，尤其是在外核層;Nrf2的表達在12h時顯著升高，1d至7d表達維持在更為顯著的高水平，NQO1在碘酸鈉注射后1d時顯著升高，此后維持在更為顯著的