抗?jié)h坦病毒單克隆抗體可變區(qū)基因分析及其噬菌體配體肽的篩選和鑒定.pdf_第1頁(yè)
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1、腎綜合征出血熱病毒(HFRSV)為布尼亞病毒科漢坦病毒(HV)屬成員.因其致病性強(qiáng),世界衛(wèi)生組織已將其列為潛在的生物戰(zhàn)劑.其中漢灘型(HTN)與漢城型(SEO)在中國(guó)廣泛分布,引起發(fā)病率和病死率較高的腎綜合征出血熱(HFRS),每年病例占全球總病例的90﹪以上.材料和方法 根據(jù)鼠源抗體可變區(qū)(V)氨基酸序列,設(shè)計(jì)合成一組抗體重、輕鏈可變區(qū)(VH/VK)簡(jiǎn)并引物.采用一步法提取單克隆抗體(McAb)H7、B11和F3細(xì)胞總RNA,通過(guò)RT

2、-PCR擴(kuò)增V基因,并進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定和分析.同時(shí),利用McAbF3及B11,應(yīng)用噬菌體肽文庫(kù)篩選特異性的抗體結(jié)合肽,夾心ELISA和競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)分析獲得的噬菌體短肽與篩選配基的結(jié)合能力及特異性,陽(yáng)性克隆序列測(cè)定和同源性分析;在此基礎(chǔ)上,通過(guò)動(dòng)物免疫試驗(yàn)初步分析噬菌體顆粒抗原的免疫原性.結(jié)論 上述McAb 可變區(qū)基因的獲得及模擬表位的初步鑒定,為有目的地開展HFRSV 基因工程抗體的遺傳改造及體外親和力成熟等研究,以及基于表位的HFR

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