乙肝病毒攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR2、4與乙肝病毒增殖的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)乙肝病毒攜帶者(ASC)乙肝病毒(HBV)的增殖情況和外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)TLR2、4的表達(dá)與活化情況，以探討HBV增殖與TLR2、4表達(dá)水平的相關(guān)性，從而為進(jìn)一步了解機(jī)體抗乙肝病毒感染的免疫功能狀態(tài)及今后開(kāi)展免疫治療研究提供依據(jù)。 方法：采集乙肝病毒攜帶者和健康志愿者靜脈血，分三部分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：第一部分非抗凝血樣本分離血清，通過(guò)時(shí)間分辨熒光免疫分析兩對(duì)半、肝功能分析儀檢測(cè)肝功能、熒光定量PCR檢測(cè)HBV D

2、NA拷貝數(shù)，結(jié)果用于分組：即HBeAg(+)組、HBeAg(一)組、正常對(duì)照組；第二部分抗凝血用Optiprep<'TM>混合法分離PBMC：分別以TLR2、4抗體作為一抗，用免疫細(xì)胞化學(xué)方法(ICC)染色測(cè)定PBMC表面TLR2、4蛋白水平的表達(dá)情況，再以RT-PCR方法測(cè)定PBMC TLR2 mRNA的表達(dá)情況；第三部分非抗凝血樣本分離血清，檢測(cè)TLR活化產(chǎn)物TNF-α的表達(dá)水平。 結(jié)果：(1)乙肝病毒攜帶者體內(nèi)HBeAg的

3、狀態(tài)與HBV DNA的拷貝數(shù)存在相關(guān)性：HBeAg(+)組伴隨高水平的HBV DNA拷貝數(shù)，而HBeAg(一)組伴隨較低水平的HBV DNA拷貝數(shù)，以此作為分組依據(jù)(r=0.760，P=0.000)。(2)外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR2的細(xì)胞陽(yáng)性率和蛋白表達(dá)水平：HBeAg(+)組：PBMC TLR2的表達(dá)均明顯低于HBeAg(一)組和正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004，P=0.003；P=0.000，P=0.000)；同時(shí)外周血單

4、個(gè)核細(xì)胞TLR2 mRNA的RT-PCR結(jié)果與免疫細(xì)胞化學(xué)的結(jié)果一致：HBeAg(+)組PBMC TLR2 mRNA的表達(dá)水平明顯低于HBeAg(一)組與正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000，P=0.000)；而外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4的免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，三組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。(3)血清中TNF-α表達(dá)水平為HBeAg(一)組明顯高于HBeAg(+)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)；同時(shí)HBeAg(+)組

5、明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。 結(jié)論：(1)乙肝病毒攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR2的表達(dá)及活化與乙肝病毒的增殖有相關(guān)性：HBeAg陽(yáng)性的乙肝攜帶者體內(nèi)病毒復(fù)制活躍、病毒DNA拷貝數(shù)高，與外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR2的表達(dá)下調(diào)有關(guān)；相反，HBeAg陰性的乙肝攜帶者體內(nèi)病毒復(fù)制相對(duì)不活躍、病毒：DNA拷貝數(shù)低，與外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR2的正常表達(dá)和活化上調(diào)有關(guān)。(2)乙肝病毒攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4的表達(dá)