結直腸癌H-,2-受體的表達及其拮抗劑對SW480細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：研究H2受體在結直腸癌的表達及意義，及研究H2受體拮抗劑西咪替丁、尼扎替丁對人結腸癌SW480細胞增殖的影響，誘導其凋亡的作用，探討H2受體拮抗劑西咪替丁、尼扎替丁抗腫瘤作用機制。 方法：采用S-P免疫組化法檢測H2受體在結直腸癌的表達及細胞S-P免疫組化法檢測H2受體在SW480細胞的表達；采用細胞活力檢測、細胞計數(shù)、MTT法觀察H2受體拮抗劑西咪替丁、尼扎替丁對SW480細胞的生長抑制作用；采用倒置顯微鏡、光鏡觀察西咪

2、替丁、尼扎替丁對SW480細胞形態(tài)的影響；采用流式細胞術檢測西咪替丁、尼扎替丁對SW480細胞凋亡和周期分布的影響。 結果： 1.60例結直腸癌H2受體陽性表達率為86.667％；而60例結直腸癌癌旁組織陽性表達率為11.667％；20例非大腸癌患者正常結腸組織H2受體陽性表達率為5.0％。這表明H2受體在結直腸癌組織標本上高表達，其陽性表達率較癌旁組織、正常組織表達要高(P<0.01)，差異有顯著性。結直腸癌組織H2

3、受體陽性表達率中低分化型較高分化型要高(P<0.05)。 2.人結腸癌SW480細胞H2受體陽性表達定位于細胞膜和(或)細胞質內，陽性信號呈棕黃色或黃色顆粒狀；這表明H2受體在SW480細胞株上存在陽性表達。 3. MTT比色法測定結果顯示，2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM西咪替丁對SW480細胞增殖的抑制率分別為11.31％、24.87％、44.93％、64.19％、89.06％；1.25μM、2.5

4、μM、5μM、10μM、20μM尼扎替丁對SW480細胞增殖的抑制率分別為14.51％、31.36％、47.12％、62.95％、87.89％；不同濃度H2受體拮抗劑西咪替丁、尼扎替丁對SW480細胞作用24小時后具有明顯的抑制增殖效應，呈劑量-效應依賴關系。 4. SW480細胞對照組細胞群體倍增時間為34.42h；當西咪替丁濃度由0μM增至10μM時，其細胞群體倍增時間由34.42h延長到67.44h(P<0.01)；尼扎替

5、丁濃度由0μM增至5μM時，其細胞群體倍增時間由34.42h延長到61.34h(P<0.01)。這表明SW480細胞經(jīng)H2受體拮抗劑作用24小時后，細胞群體倍增時間明顯延長，細胞增殖周期延長，細胞增殖速度減慢(P<0.01)。 5. 在光鏡和倒置相差顯微鏡下，與對照組相比，經(jīng)姬姆薩染色觀察，西咪替丁、尼扎替丁處理的SW480細胞，先發(fā)生皺縮，體積變小，異形性減少，細胞變圓數(shù)目增多，細胞核變小，染色變淡，核仁數(shù)量減少，部分可見染色

6、質邊集現(xiàn)象；細胞間連接疏松，隨后部分變圓細胞浮起。40μM西咪替丁及20 Μm尼扎替丁連續(xù)處理3天后，SW480細胞全部變圓，細胞核碎裂，固縮微核形成，部分不再貼壁。 6. 流式細胞術分析顯示，H2受體拮抗劑西咪替丁對SW480細胞作用24小時后的凋亡率呈劑量-效應依賴關系，并隨著西咪替丁藥物濃度提高，與空白和溶媒對照組相比，SW480細胞G2/S期細胞減少，G1期細胞增多趨勢較為明顯(P<0.01)，出現(xiàn)細胞周期G1期阻滯,并

7、且促進G1期細胞凋亡。尼扎替丁對SW480細胞作用24小時后的凋亡率呈劑量-效應依賴關系，而且隨著尼扎替丁藥物濃度提高，SW480細胞S期細胞減少，G1/G2期細胞增多趨勢較為明顯(P<0.01)，出現(xiàn)細胞周期G1/G2期阻滯，并且促進兩期細胞凋亡。 結論： 1.H2受體在結直腸癌組織有表達；結直腸癌組織H2受體在中低分化類型中陽性表達率較高分化類型陽性表達要高。 2.H2受體在人結腸癌SW480細胞株上存在