模擬失重對(duì)大鼠背根神經(jīng)節(jié)形態(tài)和GDNF的影響.pdf

1、目的:觀(guān)察模擬失重環(huán)境下大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)髓鞘形態(tài)學(xué)改變;探討尾部懸吊模擬失重對(duì)大鼠DRG內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)的影響;比較模擬失重下雌雄性大鼠DRG髓鞘形態(tài)學(xué)及GDNF變化的性別差異。
　　方法:模擬失重對(duì)大鼠DRG髓鞘的影響及性別因素的差異:選取健康成年Sprague-Dawley大鼠160只，其中雄性80只，雌性80只，隨機(jī)分為正常對(duì)照(NC)組(n=80，雄性40只，雌性40只)和尾部懸吊(HU)組(

2、n=80，雄性40只，雌性40只)。HU組通過(guò)懸吊大鼠尾部，后肢不負(fù)重來(lái)模擬失重狀態(tài)，NC組不做任何處理。4周后，通過(guò)手術(shù)摘取各組Sprague-Dawley雌雄大鼠右側(cè)腰5背根神經(jīng)節(jié)。HE染色觀(guān)察各組大鼠DRG細(xì)胞的大體形態(tài)，免疫組化下觀(guān)測(cè)各組大鼠DRG髓鞘的情況，電鏡下觀(guān)察各組大鼠DRG髓鞘的超微結(jié)構(gòu)。對(duì)雌雄大鼠之間的變化進(jìn)行對(duì)比。模擬失重對(duì)大鼠DRG內(nèi)GDNF的影響及性別因素的差異:選取健康成年Sprague-Dawley大鼠20

3、0只，其中雄性100只，雌性100只，隨機(jī)分為尾部懸吊(HU)組(n=100，雄性50只，雌性50只)和正常對(duì)照(NC)組(n=100，雄性50只，雌性50只)。按上述方法對(duì)各組大鼠進(jìn)行模型建立，4周后摘取各組Sprague-Dawley大鼠右側(cè)腰5背根神經(jīng)節(jié)。甲苯氨蘭染色觀(guān)察各組DRG內(nèi)尼氏小體變化，電鏡下觀(guān)察各組大鼠DRG細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體的微觀(guān)結(jié)構(gòu)，免疫組化觀(guān)察GDNF含量的變化，Western-blot方法檢測(cè)GDNF的蛋白表達(dá)，RT

4、-PCR檢測(cè)G DNF mRNA表達(dá)情況。對(duì)比雌雄大鼠之間的變化差異。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色結(jié)果顯示，與NC組相比，HU組背根經(jīng)節(jié)細(xì)胞間隙輕度增寬，部分節(jié)細(xì)胞與衛(wèi)星細(xì)胞分離。髓鞘堿性蛋白(MBP)免疫組化結(jié)果顯示，NC組DRG髓鞘MBP免疫組化染色及IOD值較HU組增加（雄性組P＜0.01，雌性組P＜0.001），退變的髓鞘堿性蛋白(Degen MBP)免疫組化顯示， NC組DRG髓鞘Degen MBP免疫組化染色及

5、IOD值較HU組降低（雄性組P＜0.001，雌性組P＜0.001。電鏡下可見(jiàn)HU組髓鞘板層結(jié)構(gòu)變得紊亂、松散。
　　2.甲苯氨蘭染色結(jié)果顯示，與NC組相比，HU組DRG內(nèi)尼氏體染色淺，尼氏體變小，彌散分布。電鏡下可見(jiàn)HU組DRG內(nèi)線(xiàn)粒體腫大、變形。免疫組化結(jié)果顯示，與NC組比較，HU組GDN F量及I OD值減少（雄性組P＜0.001，雌性組P＜0.001）。Western-blot結(jié)果顯示，HU組較NC組GDNF蛋白表達(dá)減少（雄

6、性組P＜0.001，雌性組P＜0.001）。RT-PCR結(jié)果顯示，與NC組相比，HU組GDNFmRNA表達(dá)降低（雄性組P＜0.001，雌性組P＜0.01）。
　　3.性別之間具有差異。
　　結(jié)論:
　　1.模擬失重可引起大鼠DRG損傷，髓鞘發(fā)生退變性變化。
　　2.模擬失重狀態(tài)下可引起大鼠DRG內(nèi)尼氏小體形態(tài)發(fā)生變化，GDNF含量減少，GDNF蛋白表達(dá)及m RNA表達(dá)降低，DRG內(nèi)線(xiàn)粒體發(fā)生損傷。
　　3.