難治性癲癇患者顳葉皮層水通道蛋白4的表達情況.pdf

1、目的： 癲癇是神經系統(tǒng)的一種常見病、多發(fā)病，其中大部分患者用目前的抗癲癇藥物能有效控制發(fā)作，但仍有20-30％癲癇患者的治療效果差，不能完全控制其發(fā)作，稱為難治性癲癇。其發(fā)病機制一直成為研究的熱點。其中癲癇腦組織中星形膠質細胞的作用越來越多的受到重視。星形膠質細胞的水通道蛋白4（Aquaporin4，AQP4）對于調節(jié)腦內微環(huán)境水鹽代謝，促膠質細胞遷移形成膠質疤痕，以及調控神經興奮性起到至關重要的作用，而這些作用與難治性癲癇的發(fā)

2、病機制有著密切的關系。因此，本研究預通過比較難治性癲癇患者與腦外傷患者顳葉皮層腦組織內AQP4表達情況的差異，進一步探討AQP4在難治性癲癇的發(fā)生和發(fā)展中起到的作用，對于開發(fā)新的抗癲癇藥物，尋找新的治療途徑，改善難治性癲癇患者的預后起到非常重要的作用。 方法： 選取實驗組：32例難治性癲癇患者顳葉皮層腦組織，患者符合以下標準： ①有EP的典型表現和腦電圖特征，用三種或者三種以上一線抗癲癇藥物且血藥濃度處于有效范圍

3、內、治療兩年以上發(fā)作仍不能控制者； ②發(fā)作類型符合1981年國際抗EP聯(lián)盟發(fā)作類型分類； ③頭顱CT或MRI檢查未發(fā)現進行性病灶； ④手術中未發(fā)現除EP外的其它神經系統(tǒng)病變和可能引起EP發(fā)作的病因； ⑤術前評估發(fā)現有比較固定的癇樣放電灶，且能進行手術者。 選取對照組：10例腦外傷患者顳葉皮層腦組織，患者符合以下標準: ①無中樞神經系統(tǒng)疾病的病史； ②除外傷外未發(fā)現腦部有能引起EP發(fā)

4、作的結構和功能損傷； ③家屬同意，并簽注知情同意書。兩組年齡統(tǒng)計無顯著性差異。根據術前臨床表現、蝶骨電極、VEEG監(jiān)測和頭顱MRI檢查綜合判斷進行定位，術中皮層電極對致癲灶定位，監(jiān)測指導手術，將病灶及或附近異常放電的腦組織切除后，立即復查ECOG見異常波消失或基本消失，選取切除腦組織。收集實驗組和對照組顳葉標本，采用免疫組化、免疫熒光雙標、western blot對AQP4表達部位和表達量進行測定，進一步探討AQP4與難治性癲癇

5、的關系。 結果： 1.臨床特點比較：實驗組和對照組年齡、性別、所取腦組織的解剖部位的無顯著差異。 2.實驗組顳葉皮層腦切片AQP4的免疫反應產物為棕黃色點狀或顆粒狀沉積在星形膠質細胞表達，神經元、小膠質細胞不表達。AQP4陽性反應產物主要表達在細胞膜上，尤其是在星形膠質細胞終足。對照組AQP4表達呈弱陽性。經生物醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)進行定量分析，統(tǒng)計分析比較，實驗組與對照組累積光密度IOD有統(tǒng)計學意義（P<0．05）

6、。 3.免疫熒光雙標結果進一步探討AQP4在上述部位的分布特征，將AQP4抗體與GFAP抗體進行免疫熒光雙標。結果發(fā)現，抗AQP4免疫活性與抗GFAP免疫活性在星形交織細胞膜上疊加，特別是在星形膠質細胞終足，呈明顯的共表達。 4.Western blot結果顯示AQP4蛋白條帶在相應的分子量處出現蛋白條帶。與對照組相比，實驗組灰度值明顯增加。這與免疫組化結果一致。 結論： 1．免疫組化和免疫熒光雙標證實A