兩種急性肺損傷模型大鼠炎性反應、激素受體mRNA水平及激素干預效果的差異.pdf

1、目的：急性肺損傷(acute lung iniury，ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)是由各種致病因素引起的肺泡上皮細胞及肺毛細血管內皮細胞屏障功能喪失，從而導致的缺氧性呼吸衰竭。ALI/ARDS的發(fā)生與一些臨床疾病有關，包括肺炎、誤吸等導致的直接肺損傷以及創(chuàng)傷、敗血癥等導致的間接肺損傷，其中敗血癥和誤吸是其最常見的病因。人類ALI/ARDS的發(fā)生、發(fā)展極為

2、復雜，極少由單一致傷因素所致。與一次打擊模型相比，二次打擊模型能夠更加準確地反映ALI/ARDS患者共同的疾病和危險因素，因此研究二次打擊ALI動物模型對于ALI發(fā)病機理的闡明與干預效果評價具有重要意義。 炎癥性細胞因子和化學介質的復雜網(wǎng)絡在介導、擴大、維持肺損傷方面起重要作用，同時產(chǎn)生的抗炎性細胞因子能抵抗促炎性細胞因子的效應從而減輕炎癥反應的強度。促炎和抗炎性細胞因子的平衡是闡明這一破壞性臨床綜合征發(fā)病機理的重要方面。雖然大

3、量研究已證實了炎癥反應在ALI發(fā)病中的作用，但對不同打擊所致ALI炎癥機制差異方面的認識較少。糖皮質激素(glucocorticoids，GCs)具有強大的抗炎特性，在ALI中的應用已有多年的歷史，但臨床發(fā)現(xiàn)不同打擊的ALI患者對激素治療的反應存在較大差異，其具體機制有待于進一步探討。GCs通過與細胞內廣泛分布的糖皮質激素受體(glucocorticoid receptor，GR)結合而發(fā)揮大部分效應，GR通過細胞內基因組機制由GRmR

4、NA翻譯合成，故GRmRNA水平的變化可以導致GR表達水平的異常，從而影響GCs療效的發(fā)揮。這可能是導致激素治療效果差異的機制之一。因此，本研究復制了脂多糖(Liopolysaccharide，LPS)一次打擊及LPS-鹽酸(Hydrochloric acid，HCl)二次打擊ALI動物模型，比較細胞因子水平、GRmRNA表達及GCs干預對二者的影響以探討不同打擊所致ALI炎癥機制、激素治療效果的差異及其潛在機理。 方法：健康雄

5、性SD大鼠48只，隨機分為6組：①NS組：尾靜脈注射生理鹽水1.2ml/kg，4小時后氣管內緩慢滴注生理鹽水0.5ml/kg，②LPS組：尾靜脈注射LPS(8mg/kg)，③LPS-HCl組：尾靜脈注射LPS(4mg/kg)，4小時后氣管內緩慢滴注HCl(pHl.8，0.5ml/kg)，④NS+Dex組，⑤LPS+Dex組，⑥LPs-HCl+Dex組，每組8只動物。④、⑤、⑥三組為激素干預組，造模后立即腹腔注射Dex(2mg/kg)。

6、 模型復制后4小時，10％水合氯醛腹腔注射麻醉(4ml/kg)，開胸處死動物后立即心臟穿刺采血，收集血液，離心(3000rpm，4℃，10min)，吸取上清，一80℃保存，檢測血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的含量。取右肺前葉肺組織100mg，提取組織總RNA，用R17-PCR法檢測肺組織中GRmRNA的相對含量。取右肺下葉，10％中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋做病理切片，觀察肺組織病理形態(tài)學變化并評分。取右

7、肺后葉及副葉進行W/D的測定(80℃，48h)。經(jīng)氣管插管行左肺支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液(BALF)，離心(1200rpm，4℃，10min)，吸取上清，-80℃保存，檢測BALF中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的含量和蛋白水平。細胞沉淀懸浮于200微升生理鹽水中，進行白細胞計數(shù)。 結果：(1)LPS組和LPS-HCl組肺W/D、BALF中細胞總數(shù)及蛋白含量均高于NS組(P<0.05)。除BALF中蛋白含

8、量這一指標LPS-HCl組明顯高于LPS組外，其它兩個指標在兩個肺損傷模型組之間無差別(P>0.05)。這些指標在LPS+Dex組均顯著下降(P<0.05)，而LPS-HCI+Dex組只有肺W/D下降(P<0.05)。(2)LPS組和LPS-HCl組光鏡下肺組織病理評分明顯高于NS組(P<0.05)，而兩個肺損傷模型組之間無差別(P>0.05)。肺組織病理評分在LPS+Dex組和LPS-HCI+Dex組均顯著低于相應模型組(P<0.01

9、)，但LPS-HCI+Dex組病理評分明顯高于LPS+Dex組(P<0.01)。(3)各組血清中IL-1β的含量均未測得，LPS組和LPS-HCl組血清和BALF中TNF-α含量及BALF中IL-1β的含量顯著高于NS組(P<0.01)。LPS+Dex組血清和BALF中TNF-α含量及BALF中IL-1β的含量均低于LPS組(P<0.05)。LPS-HCI+Dex組血清和BALF中TNF-α含量低于LPS-HCl組(P<0.05)。(4

10、)LPS和LPS-HCl組血清和BALF中IL-4、IL-10含量均顯著高于NS組(P<0.05)。LPS+Dex組和LPS-HCI+Dex組血清和BALF中IL-10含量均較相應模型組升高(P<0.05 )。(5)LPS組和LPS-HCl組肺組織中GRmRNA水平較NS組顯著降低(P<0.01)。Dex能明顯上調兩模型組的GRmRNA水平(P<0.05)，而LPS+Dex組的GRmRNA水平顯著高于LPS-HCI+Dex組(P<0.0

11、1)。 結論：(1)ALI/ARDS發(fā)展過程中GRmRNA表達減少，引起受體水平上的腎上腺皮質功能不全，削弱了抗炎機制，這可能是肺損傷發(fā)生發(fā)展中的一個重要環(huán)節(jié)。 (2)一次打擊及二次打擊所致ALI/ARDS細胞因子水平方面存在一定的差異，說明ALI/ARDS的炎癥機制與致病因素是緊密相連的。 (3)激素治療一次打擊及二次打擊ALJ/ARDS的療效不同，雖然激素能在一定程度上減輕兩組的肺損傷程度，但LPS組的治療