糖尿病大鼠心臟及主動(dòng)脈中硝化蛋白質(zhì)的檢測(cè).pdf

1、糖尿病日益成為一種嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病。糖尿病對(duì)身體的危害主要來(lái)自其并發(fā)癥，心血管疾病并發(fā)癥是糖尿病患者致死的主要原因。越來(lái)越多的證據(jù)表明，活性氧和活性氮介導(dǎo)糖尿病心血管并發(fā)癥的病理過(guò)程。蛋白質(zhì)酪氨酸硝化與氧化損傷正相關(guān)。這就意味著，可以用檢測(cè)蛋白質(zhì)硝化的程度來(lái)反映糖尿病心血管并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。 本文的主要工作是，利用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和免疫印跡技術(shù)(Western blotting)

2、檢測(cè)不同病程的糖尿病大鼠心血管中蛋白質(zhì)硝化情況，初步探討蛋白質(zhì)硝化與糖尿病心血管并發(fā)癥的關(guān)系。完成的工作主要包括以下幾方面： （1）為了確定檢測(cè)糖尿病心肌中蛋白質(zhì)硝化的最佳的Western blotting 的試驗(yàn)條件，首先檢測(cè)了不同硝化體系(Hemin/NO2-/H2O2、Hemoglobin/NO2-/H2O2 和Fe3+/NO2-/H2O2)催化的蛋白質(zhì)－脂質(zhì)體混合物中蛋白質(zhì)的硝化，并探討了脂質(zhì)體和pH 對(duì)蛋白質(zhì)硝化的影響

3、。最終確定了最佳的Western blotting 的試驗(yàn)條件：①半干轉(zhuǎn)膜的最佳時(shí)間是1 h 40min；②抗3-硝基酪氨酸抗體的最佳稀釋濃度比為1:600；③辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗的最佳稀釋濃度比為1:3000。 （2）根據(jù)體外實(shí)驗(yàn)確定的最佳的Western blotting 的試驗(yàn)條件，檢測(cè)了不同病程（0天、30 天、60 天）的糖尿病大鼠心肌勻漿中的蛋白質(zhì)硝化、氧化和iNOS 的水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，0 天和60 天病程的