長期高糖導致胰島β細胞功能損傷的分子機制.pdf

1、 本研究通過對高糖作用一定時間的β細胞的胰島素基因表達及分泌功能的檢測來觀察β細胞功能障礙的表現(xiàn)模式。并進一步對功能受損的β細胞進行分子生物學檢測，通過觀察長期高糖作用對KI-3K及IDX-1活性及表達的影響來揭示高糖導致β細胞功能損傷的分子機制。 方法:首先進行Wistar大鼠體外胰島分離及培養(yǎng)和β細胞功能損傷模型的建立.然后利用免疫沉淀、及Western技術檢測細胞第4周末時PI3K的p85亞單位的蛋白含量以及與IRS-1

2、/IRS-2的結合的p85的蛋白含量、磷酸化的PKB的蛋白含量(N=4)。半定量RT-PCR檢測培養(yǎng)至第3、4周的三組細胞的IDX-1的mRNA表達量(N=4)。以及Westen免疫印跡分析檢測第4周末三組的IDX-1的蛋白表達量。并用間接免疫熒光和免疫組化染色顯示IDX-1在不同狀態(tài)下下細胞內的原位表達(N=6)。 研究表明:體外高濃度葡萄糖長期培養(yǎng)可使β細胞的功能受損，表現(xiàn)為胰島素刺激后胰島素的合成及分泌能力均下降。長期高濃度