CpG ODN聯(lián)合光動力學療法對小鼠Heps肝癌抗腫瘤及免疫效應的研究.pdf

1、目的: 光動力學療法(PDT)作為腫瘤的局部療法，可誘導宿主產(chǎn)生抗腫瘤免疫，與免疫療法(IT)聯(lián)合使用，即光免疫療法(PIT)可放大免疫應答的強度。含非甲基化的胞嘧啶和鳥嘌呤核苷酸基序的寡聚脫氧核苷酸(CpG ODN)能誘導激活抗腫瘤免疫應答，是一種安全有效的免疫佐劑?；贑pG ODN的這一特性，本實驗應用PDT對小鼠Heps肝癌移植瘤進行實驗性治療，研究CpG ODN局部免疫治療是否能增強PDT對小鼠Heps肝癌移植瘤的抗腫瘤和免疫

2、效應，探討聯(lián)合治療的有效性，為臨床肝癌PIT治療肝癌，增強PDT療效提供一定的實驗依據(jù)。 方法: 92只ICR小鼠，建立小鼠Heps肝癌移植瘤模型，隨機分為對照組、PDT組、IT組和PIT組，每組23只。PDT組小鼠尾靜脈注射光敏劑癌光啉(PSD-007)20 mg/kg體重，24小時后光照腫瘤局部，功率密度為150 mW/cm2，能量密度為135 J/cm2。免疫治療組的小鼠腫瘤局部注射CpG ODN 100ug。PIT組于P

3、DT后即刻在小鼠的腫瘤局部注射CpG ODN 100ug。 1.觀察各組小鼠生存期； 2.測量各組小鼠的腫瘤大小，計算體積抑瘤率； 3.各組分別于治療后2h、24h及72h分批處死5只小鼠，瘤組織取材，常規(guī)病理切片，HE染色； 4.取各組小鼠上述時間點的瘤組織切片，免疫組織化學染色計PCNA標記指數(shù)(PCNA-LI)，計數(shù)腫瘤局部巨噬細胞(Mφ)、CD8+細胞毒性T淋巴細胞(CD8+CTL)； 5

4、.于上述時間點收集各組小鼠的外周血并分離血清，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測小鼠血清中細胞因子干擾素(IFN)-γ和白細胞介素(IL)-12的分泌水平。 結(jié)果: 1.各組小鼠生存時間：PDT和PIT組小鼠的生存時間較對照組和單純免疫治療組相比，明顯延長(P<0.01)。PIT組小鼠生存時間較PDT組明顯延長(P<0.01)。IT組與對照組生存時間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 2.各組小鼠腫瘤體積及抑瘤率：P

5、DT組、PIT組治療后2天、8天和16天移植瘤的體積均較對照組均明顯縮小(P<0.01)。PDT組、PIT組治療后8天以及16天的腫瘤體積較11r組和對照組均明顯縮小(P<0.05)，PIT組腫瘤體積較單純PDT組明顯縮小(P<0.05)。IT組治療后8天和16天腫瘤體積均較對照組減小(P<0.01)。IT組、PDT組和PIT組治療后16天的抑瘤率分別為20.09％、73.88％、84.87％。 3.各組小鼠腫瘤HE染色：對照組

6、腫瘤細胞分布密集，呈彌漫性生長，細胞變性壞死及免疫細胞少見。PDT組治療后2h可見瘤細胞退變明顯，呈空泡變性；PDT后24h可見瘤細胞核固縮，大片狀壞死；PDT后72h見到瘤細胞形態(tài)消失，呈凝固性壞死，可見炎細胞浸潤。PIT組治療后可見腫瘤組織壞死明顯，較單純PDT組壞死面積更大，伴有大量炎細胞浸潤。IT組治療后，瘤組織壞死無明顯變化，僅有少許小灶性壞死，間質(zhì)中大量炎性細胞浸潤。 4.各組小鼠腫瘤PCNA-IHC染色：PDT組和

7、PIT組治療后2h、24h以及72h腫瘤局部PCNA-LI，均明顯低于對照組和單純免疫治療組(P<0.01)。PIT組上述時間點腫瘤局部PCNA-LI，明顯低于單純PDT組(P<0.01)。IT組治療后72h腫瘤局部PCNA-LI，明顯低于對照組(P<0.01)。 5.各組小鼠腫瘤F4/80-IHC染色：PDT組和PIT組治療后2h、24h以及72h腫瘤局部巨噬細胞數(shù)量，均明顯高于荷瘤對照組和單純免疫治療組(P<0.05)。PI

8、T組上述時間點腫瘤局部巨噬細胞數(shù)量，明顯高于單純PDT組(P<0.01)。IT組治療后24h和治療后72h腫瘤局部巨噬細胞數(shù)量，明顯高于對照組(P<0.01)。 6.各組小鼠腫瘤CD8a-IHC染色：PDT組、IT組和PIT組治療后72h后的腫瘤局部CD8+CTL數(shù)量，均明顯高于荷瘤對照組(P<0.05)；PDT和PFT組治療后72h后腫瘤局部CD8+CTL數(shù)量明顯高于IT組(P<0.01)；PIT組治療72h腫瘤局部CD8+C

9、TL數(shù)量明顯高于單純PDT組(P<0.01)。 7.各組小鼠血清中IL-12、IFN-γ水平：PDT組和PIT組治療后2h、24h以及72h，血清中細胞因子IL-12和IFN-γ水平均明顯高于對照組和單純免疫治療組(P<0.01)。PIT組治療后2h血清中IL-12水平，明顯高于單純PDT組(P<0.01)；治療后24h.以及72h血清中IL-12、IFN-γ的水平，均明顯高于單純PDT組(P<0.05)。IT組治療后24h，血

10、清中細胞因子IL-12水平明顯高于對照組(P<0.01)；治療后72h，IL-12和IFN-γ水平均明顯高于對照組(P<0.01)。 結(jié)論: 1.PDT可使小鼠Heps肝癌細胞變性壞死，降低PCNA標記指數(shù)，抑制腫瘤增殖，明顯延長荷瘤小鼠的生存時間。 2.PDT引起腫瘤局部Mφ、CD8+CTL浸潤及血清中IL-12、IFN-γ水平表達顯著增加，有效動員宿主參與局部及全身抗腫瘤免疫應答。 3.瘤內(nèi)局部注射免