細(xì)胞應(yīng)激適應(yīng)中HSP90的作用和應(yīng)激適應(yīng)保護(hù)蛋白的初步篩選.pdf

1、目的:1.建立小鼠成纖維細(xì)胞系NIH-3T3應(yīng)激適應(yīng)細(xì)胞模型,為應(yīng)激適應(yīng)研究提供平行可比的實(shí)驗(yàn)對(duì)象.2.建立HSP90穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞系,探討HSP90在應(yīng)激適應(yīng)中作用及機(jī)制.3.建立雙向電泳技術(shù)平臺(tái),初步分析應(yīng)激與適應(yīng)對(duì)蛋白質(zhì)合成的影響,篩選應(yīng)激適應(yīng)相關(guān)蛋白.結(jié)論:1.通過對(duì)NIH-3T3細(xì)胞進(jìn)行預(yù)熱處理,通過觀測(cè)細(xì)胞膜損傷、DNA損傷、細(xì)胞形態(tài)變化情況,確定應(yīng)激保護(hù)的時(shí)間點(diǎn),建立了細(xì)胞應(yīng)激適應(yīng)模型,初步確認(rèn)HSP90在該模型中的保護(hù)作

2、用.2.通過轉(zhuǎn)染人類HSP90 β基因可獲得HSP90穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株.HSP90高表達(dá)導(dǎo)致HSP90蛋白細(xì)胞內(nèi)分布改變,應(yīng)激反應(yīng)性增強(qiáng),與部分底物蛋白的結(jié)合性改變.提示細(xì)胞可通過HSP90分子伴侶功能,抗衡應(yīng)激反應(yīng)中蛋白質(zhì)變性引起的細(xì)胞損傷.3.雙向電泳分析結(jié)果提示,細(xì)胞在緊急應(yīng)激狀態(tài),可能會(huì)傾向于選擇性地合成能夠迅速翻譯的小分子量蛋白質(zhì),應(yīng)對(duì)應(yīng)激損傷.預(yù)適應(yīng)可通過提高細(xì)胞內(nèi)保護(hù)性蛋白的貯備量,在再次應(yīng)激時(shí)發(fā)揮保護(hù)作用.中間絲vimen