鬼針草總黃酮的制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及對(duì)急性肝損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、肝損傷是各種肝病共同的病理基礎(chǔ)，及時(shí)控制肝損傷的發(fā)生和發(fā)展對(duì)治療肝病具有重要的臨床意義。病毒性肝炎的發(fā)病率在我國位于世界首位，雖然我國已經(jīng)投入大量的財(cái)力和物力進(jìn)行肝炎發(fā)病機(jī)制和治療的研究，但是至今仍無滿意的治療藥物?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)的治療戰(zhàn)略正在從對(duì)抗療法轉(zhuǎn)向調(diào)節(jié)對(duì)策，從抗病毒的研究趨向于改變機(jī)體，促進(jìn)機(jī)體防御能力的研究。中醫(yī)藥防治肝病的長(zhǎng)期臨床實(shí)踐積累給肝臟疾病藥物研究奠定了基礎(chǔ)，特別是前人對(duì)肝炎(中醫(yī)相關(guān)疾病為“黃疸”等)治療的理論總結(jié)和處

2、方用藥經(jīng)驗(yàn)，為當(dāng)今保肝藥物研究提供了線索和捷徑。 鬼針草 (Bidens bipinnata L．)系菊科鬼針草屬一年生草本植物，在我國大多數(shù)省區(qū)均有分布。鬼針草藥用歷史悠久，味苦、性平而無毒，具有清熱解毒，散瘀消腫等功效。其主要成分有黃酮苷、皂苷、生物堿、揮發(fā)油等，民間用于治療痢疾、腹瀉、肝炎、胃痛等。鬼針草富含黃酮類化合物，葉中含量高達(dá)5％，主要為查耳酮類、噢哢類、黃酮醇類等。但迄今為止，富含的黃酮類成分卻未被開發(fā)利用。此外

3、，在我省民間中醫(yī)臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，鬼針草及含有鬼針草的復(fù)方制劑治療病毒性肝炎有很好療效，可以顯著降低肝病患者的ALT、AST，退黃，且無明顯的毒副作用，是民間常用的保肝治肝藥物。為了進(jìn)一步開發(fā)利用鬼針草，我們對(duì)鬼針草總黃酮 (total flavonoids of Bidens bipinnata L．，TFB)的制備工藝及其保肝活性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。 具體研究?jī)?nèi)容包括以下三個(gè)部分： 1．鬼針草總黃酮制備工藝的研究

4、 采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)鬼針草總黃酮乙醇提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定乙醇提取的生產(chǎn)工藝為用12倍量80％乙醇提取2次，每次1小時(shí)。并從總黃酮靜態(tài)吸附-解吸量、動(dòng)態(tài)吸附-解吸量、靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)過程等方面，對(duì)國產(chǎn)七種大孔吸附樹脂進(jìn)行研究，選擇出了一種最適合于制備鬼針草總黃酮的大孔吸附樹脂HPD100。并對(duì)HPD100純化總黃酮的工藝參數(shù)進(jìn)行考查，確定其工藝條件為原液上樣濃度為1～1.5mg·mL<'-1>，以2BV·h<'-1>的吸附速率進(jìn)行吸附，最大

5、上樣量以總黃酮計(jì)為4.99mg·ml<'-1>樹脂。吸附后先以4BV水洗去雜質(zhì)，再用4BV的70％乙醇以4 BV·h<'-1>的速率進(jìn)行洗脫。在此條件下進(jìn)行吸附、洗脫，樹脂可重復(fù)使用5次。經(jīng)大孔樹脂吸附、乙醇解吸后，采用比色法測(cè)定總黃酮含量為72.1％，得率為4.7％。 2.TFB質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 質(zhì)量控制是中藥研制工作的重點(diǎn)。本文利用化學(xué)鑒別法和薄層層析法對(duì)TFB進(jìn)行定性鑒別；采用NaNO<,2>-Al(NO<,3>)-

6、NaOH顯色系統(tǒng)，用紫外分光光度法測(cè)定了鬼針草總黃酮提取物中黃酮的含量。TFB的含量為73.3％，平均回收率為96.51％，RSD為2.6l％。該法簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好，可用于TFB的質(zhì)控方法。 應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)TFB中金絲桃苷的含量進(jìn)行測(cè)定。采用HypersilODS2 5μm色譜柱(4.6mm×250mm)，流動(dòng)相為乙腈-3％醋酸溶液(13：87)，流速為1.0ml·min<'-1>，檢測(cè)波長(zhǎng)為363nm，柱溫為30℃，

7、采用外標(biāo)法定量，測(cè)定 TFB中金絲桃苷含量。金絲桃苷的線性范圍為1.2526～34.1μg·ml<'-1>，r=0.9998；回收率99.62％，RSD為1.75％。該法對(duì)黃酮類化合物的分離度良好，所確立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可以有效的控制TFB的含量，為TFB及制劑的開發(fā)研究奠定了基礎(chǔ)。 3.TFB對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及部分機(jī)制研究 在優(yōu)化的TFB制備工藝條件下，以CCl<,4>誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型，初步研究TFB的保肝

8、作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：TFB(50、100、200 mg·kg<'-1>) ig給藥，與模型組比較，能顯著降低CCl<,4>肝損傷小鼠的肝臟指數(shù)，降低血清ALT、AST活性。光鏡下病理組織學(xué)檢查表明給予TFB后能明顯減輕肝組織變性、壞死程度，并減輕炎癥反應(yīng)。以上結(jié)果提示：TFB對(duì)CCl<,4>誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷有明顯的預(yù)防作用。 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，TFB顯著降低小鼠肝勻漿中MDA、NO啥量，升高肝勻漿SOD、GSH-