PARP-1-AIF通路在大鼠實驗性蛛網膜下腔出血后早期細胞凋亡中的作用和意義.pdf

1、目的:
　　 檢測大鼠蛛網膜下腔出血(SAH)后，在廣譜天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(caspases)抑制劑(Z-VAD-FMK)作用下，海馬組織半胱氨酸天冬酶3(Caspase3)和多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶-1[poly(ADP-ribose)-polymerase1，PARP-1]和凋亡誘導因子(apoptosis-inducing factor，AIF)的表達情況；與海馬組織細胞凋亡關系，以及SAH后神經功能評分的關

2、系。探討Caspase凋亡途徑受抑制后PARP-1/AIF途徑對大鼠海馬組織細胞凋亡的影響。
　　 方法:
　　 雄性SD大鼠分為空白對照組、模擬手術組，非抑制組(SAH+DMSO)(24h、48h、72h)和抑制組(SAH+Z-VAD-FMK)(24h、48h、72h)，SAH模型為大鼠單次視交叉池注血模型。抑制組大鼠SAH造模后1h立即將廣譜caspases抑制劑Z-VAD-FMK行大鼠右側腦室緩慢注射，非抑制組則注

3、射相同量的DMSO。各組大鼠處死前用平衡木實驗評價大鼠的神經功能，然后麻醉后用多聚甲醛灌注處理，1h后取出腦組織，HE觀察海馬組織炎癥反應強度；免疫組化測定海馬組織Caspase3、PARP-1和AIF表達；末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記法(terminaldeoxynucleotidal transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL)檢測海馬組織細胞凋

4、亡程度。比較空白對照組、模擬手術組和SAH后各時間組神經功能評分，大鼠海馬組織炎癥反應強度，Caspase3、PARP-1和AIF表達改變，海馬組織細胞凋亡數(shù)量變化。
　　 結果:
　　 1與空白對照組和模擬手術組大鼠比較，SAH后各組大鼠神經功能評分在6h降低明顯，提示神經功能減退嚴重，12h后開始恢復，24小時仍明顯(p<0.05)，之后逐漸恢復，到72h已與空白對照組和模擬手術組SD大鼠評分無差異(p>0.05)。

5、Z-VAD-FMK治療組大鼠與安慰劑(1％DMSO)組大鼠相比神經功能評分無明顯差異(p>0.05)。
　　 2 HE染色顯示，與空白對照組和模擬手術組大鼠比較，SAH大鼠海馬區(qū)組織在24h炎性細胞滲出明顯增多，48h后開始減少；Z-VAD-FMK治療組各時間段炎性細胞滲相比非抑制組輕。
　　 3同空白對照組、模擬手術組大鼠相比，SAH組大鼠海馬組織Caspase-3蛋白表達水平有明顯差異性(P<0.05)，SAH各組在

6、后24h升高明顯，48h、72h緩慢下降但仍處于較高表達水平(p<0.05)；Z-VAD-FMK治療組各時間點Caspase-3蛋白表達水平相比非抑制組明顯低(p<0.05)，組內各時間段比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 4與空白對照組和模擬手術組大鼠相比，SAH組大鼠海馬組織AIF蛋白表達水平有明顯差異性(P<0.05)，抑制組大鼠海馬區(qū)組織AIF表達水平在SAH后24h升高明顯，48h達峰值，后逐漸下降。非抑制組AI

7、F表達水平明顯低于抑制組，在24h達峰值。非抑制組和抑制組比較差有明顯差異性(P<0.05)，組內各時間段比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 5 SAH抑制組大鼠海馬區(qū)組織PARP-1表達水平在24h升高明顯，在72h達峰值。非抑制組PARP-1表達水平明顯低于抑制組(p<0.05)，在48h達峰值。SAH組個時間點PARP-1表達水平均高于空白對照組和模擬手術組(P<0.05)。組內各時間段比較無差異(P>0.05)。<

8、br>　　 6空白對照組和模擬手術組海馬組織及周圍僅見個別陽性細胞。SAH后24h、48h、72h各時間段抑制組比非抑制組凋亡陽性率低(p<0.05)，但與空白對照組和模擬手術組相比陽性細胞率均增高明顯(P<0.05)
　　 結論:
　　 1、大鼠SAH后立即出現(xiàn)神經功能缺損，后逐漸恢復，72h后與空白對照組無差異。
　　 2、大鼠SAH后，雖然應用Caspase廣譜抑制劑Z-VAD-FMK能使海馬組織細胞凋亡