MICA基因多態(tài)性與習慣性流產、不孕癥的相關性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:(1)研究湖南和湖北地區(qū)漢族人群中MICA基因多態(tài)性分布特征;(2)研究MICA基因多態(tài)性與習慣性流產、不孕癥的關系,并進一步探討可能的分子機制。
   方法:(1)PCR-SSP法分析162例湖南地區(qū)漢族人群和193例湖北地區(qū)漢族人群MICA基因外顯子2~4的多態(tài)性,并與其他人群中該基因的分布進行比較;(2)PCR—SSP方法檢測56例習慣性流產患者和78例正常對照的MICA基因外顯子2~4多態(tài)性分布,并進行相關性分析;

2、(3)PCR-SSP法檢測214例不孕癥患者MICA基因外顯子2~4多態(tài)分布,ELISA法檢測患者血清抗沙眼衣原體IgG抗體,并進行相關性分析;(4)直接測序法確定HeLa細胞和U373細胞的MICA基因型;通過實時定量PCR、Western blot和流式細胞術分別從mRNA、蛋白質水平檢測沙眼衣原體感染HeLa細胞和U373細胞后,不同時間點(Oh、12h、24h、36h)MICA mRNA、MICA總蛋白和細胞膜表面MICA分子的

3、變化,并通過體外細胞毒實驗檢測NK細胞對沙眼衣原體感染的HeLa細胞和U373細胞在不同時間點(0h、12h、24h、36h)的殺傷效應。
   結果:(1)湖南漢族人群中共檢測到11個MICA等位基因,其中MICA*0080I/02等位基因頻率最高(40.4%),其次為MICA*0020I/020(20.1%)和MICA*010(17.3%),MICA*019(0.3%)和MICA*031(O.3%)等位基因頻率最低;湖北漢族

4、人群中共檢測到13個MICA等位基因,其中MICA*0080I/02等位基因頻率最高(33.7%),其次為MICA*010(18.4%)、MICA*0020I/020(13.9%)和MICA*0120I/02(9.6%),MICA*005(0.5%)和MICA*027(0.5%)等位基因頻率最低;兩個地方人群MICA等位基因分布頻率與其他人群(朝鮮人、泰國人、美洲白人和非洲裔美洲人)比較,有顯著性差異(P

5、者組中共檢測出8個MICA等位基因,其中MICA*0080I/02等位基因分布頻率較高而MICA*018等位基因分布頻率最低;正常對照組中共檢出9個MICA等位基因,經統(tǒng)計學分析,其中也是MICA*0080I/02等位基因分布頻率較高,而MICA*005和MICA*0120I/02等位基因分布頻率最低,習慣性流產患者與正常對照組之間MICA各等位基因分布頻率均無顯著性差異(P〉O.05);(3)有輸卵管病理改變的不孕癥患者中66.7%(

6、42/63)的個體抗沙眼衣原體IgG抗體陽性,而無輸卵管病理改變的不孕癥患者中僅39.1%(59/151)的個體抗沙眼衣原體IgG抗體陽性(OR:3.12,95%CI:1.68—5.78,P=0.004),高水平的抗沙眼衣原體IgG抗體增加了不孕癥患者輸卵管發(fā)生病理改變的風險性(OR:6.88,95%CI:3.34—14.20,P=0.001);根據抗沙眼衣原體IgG抗體是否為陽性對不孕癥患者進行分組,兩組中共檢測到9個MICA等位基因

7、,其中等位基因MICA*008在兩組間的分布存在差異,抗沙眼衣原體IgG抗體陰性的不孕癥患者組MICA*008分布頻率顯著高于抗沙眼衣原體IgG抗體陽性的不孕癥患者組(38.1%:22.3%,P=0.0004,Pc=0.00367,OR:2.14,95%CI:1.40—3.28);根據是否存在輸卵管病理改變對不孕癥患者進行分組,兩組間MICA等位基因分布頻率無顯著性差異(P〉0.05);根據是否有輸卵管病理改變對抗沙眼衣原體IgG抗體陽

8、性的不孕癥患者進行分組,兩組間MICA等位基因分布頻率無顯著性差異(P>O.05);(4)HeLa細胞為MICA*008純合子,U373細胞為MICA*001純合子;沙眼衣原體感染HeLa細胞和U373細胞0h~36h時兩細胞的MICAmRNA變化趨勢相同,其中0h時MICAmRNA均有低水平的表達,12h時表達水平升高,24~36h時表達水平降低;沙眼衣原體感染HeLa細胞0h~36h時MICA蛋白表達水平未降低;沙眼衣原體感染U37

9、3細胞0h~12h時MICA蛋白表達水平降低不明顯,24h~36h時蛋白表達水平降低;沙眼衣原體感染HeLa細胞0h~36h時細胞膜MICA蛋白表達水平較穩(wěn)定,沙眼衣原體感染U373細胞0h~12h時細胞膜MICA蛋白表達水平變化不明顯,24h~36h時表達水平降低;隨感染時間的延長(0h~36h),NK細胞對沙眼衣原體感染HeLa細胞的殺傷效應不斷增高;NK細胞對沙眼衣原感染的U373細胞12h殺傷效應增高,24h~36h殺傷效應降低

10、。
   結論:(1)湖南和湖北漢族人群MICA外顯子2~4等位基因的分布頻率與其他人群之間存在差異,其中MICA*00801/02等位基因分布頻率均較高;(2)MICA外顯子2~4等位基因多態(tài)性分布與習慣性流產之間無相關性;(3)不孕癥患者抗沙眼衣原體IgG抗體水平與其輸卵管病理改變相關;(4)不孕癥患者MICA*008等位基因分布頻率與抗沙眼衣原體IgG抗體負相關;(5)不孕癥患者MICA基因的多態(tài)性分布與輸卵管病理改變、沙

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