PTEN基因對T淋巴細胞分化的影響.pdf

1、目的:根據(jù)分泌細胞因子和參與的免疫反應的不同Th細胞被分為功能不同的Th1和Th2兩個效應細胞亞群。Th1細胞分泌IL-2、IFN-γ、INF-β等細胞因子;Th2細胞則產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等細胞因子。Th1、Th2細胞參與不同的免疫應答。TH1細胞通過分泌的細胞因子,具有抗病毒及其他細胞內(nèi)病原體、清除癌變細胞、介導遲發(fā)性超敏反應和器官特異性自身免疫性疾病的作用。Th2細胞則通過產(chǎn)生的細胞因子介導體液

2、免疫應答,與過敏性疾病,抗細胞外感染,移植物耐受,抑制自身免疫疾病等有關。在造血干細胞移植免疫中,TH1細胞被認為和GVHD反應相關,而TH2細胞具有誘導免疫耐受,減少排異反應的作用。對T淋巴細胞的分化調控機制進行深入研究有助于闡明GVHD)免疫反應發(fā)生機制具有重要意義。
　　 已知T-BET是T淋巴細胞向TH1分化的重要轉錄因子,調控IFN-γ的分泌;GATA3基因是T淋巴細胞向TH2分化的重要轉錄因子,調控IL-4的分泌。影

3、響Th細胞分化的PI3K/AKT(phosphatidylinositol_3'kinas/proteinkinase B)途徑、MAPK(有絲分裂原激活蛋白激酶)途徑亦是與張力蛋白同源的10號染色體缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensinhomolog deletedon chromosome ten,PTEN)作用的重要通路。為了研究PTEN基因介導的PI3K/AKT途徑對T淋巴細胞分化的作用,本研究以人T淋巴

4、細胞白血病細胞株iurkat細胞為研究對象,jurkat細胞具有分泌IFN-γ和IL-4的功能,因此可以作為研究T淋巴細胞的分化的靶細胞。通過轉染PTEN基因,了解轉染后過表達的PTEN基因對jurkat細胞T-bet,GATA-3表達的影響、以及jurkat細胞分泌IL-4和IFN-γ的變化,為進一步揭示T淋巴細胞分化的信號轉導機制打下基礎。
　　 方法:
　　 用攜帶有野生型PTEN基因及編碼綠色熒光蛋白基因的腺病毒

5、(Ad-PTEN-GFP)或空載體腺病毒(Ad-GFP),轉染iurkat細胞系,RT-PCR檢測轉染PTEN基因后對T-bet,GATA-3的表達的影響、以及細胞分泌IL-4和IFN-γ的變化。
　　 結果:
　　 1 用Ad-PTEN-GFP或Ad-GFP轉染jurkat細胞系,Ad-PTEN-GFP的jurkat胞內(nèi)PTEN(0.702±0.1)水平明顯高于未作任何處理的jurkat細胞組(0.307±0.03)和

6、AD.GFP轉染組(0.306±0.02),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細胞組和AD-GFP組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2 轉染48h后,轉染Ad-PTEN-GFP的iurkat細胞內(nèi)T-bet(0.603±0.1)水平明顯高于未作任何處理的jurkat細胞組(0.323±0.02)和AD-GFP轉染組(0.319±0.04),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細胞組和AD-GFP轉染組

7、無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3 轉染48h后,轉染Ad-PTEN-GFP的jurkat細胞內(nèi)IFN-γ(0.613±0.01)明顯高于未作任何處理的jurkat細胞組(0.345±0.02)和AD-GFP轉染組(0.343±0.04),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細胞組和AD-GFP轉染組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 4 轉染48h后,轉染Ad-PTEN-GFP的iurkat細胞內(nèi)GA

8、TA3水平(0.132±0.02)明顯低于未作任何處理的jurkat細胞組(0.396±0.05)和AD-GFP轉染組(0.389±0.06),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細胞組和AD-GFP轉染組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 5 轉染48h后,轉染Ad-PTEN-GFP的jurkat細胞內(nèi)IL-4水平(0.289±0.01)明顯低于未作任何處理的jurkat細胞組(0.851±0.02)和AD-GFP

9、轉染組(0.848±0.01),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細胞組和AD-GFP轉染組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結論:本研究成功的應用攜帶有野生型PTEN基因及編碼綠色熒光蛋白基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP),轉染jurkat細胞系,使PTEN基因的表達明顯增強。PTEN的高表達使T淋巴細胞的T-bet和IFN-γ的表達明顯增高;而GATA3和IL-4基因的表達水平降低,這些結果提示PTEN基