SD大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)染為胰島素分泌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:1.研究脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外能否被轉(zhuǎn)染成為胰島素分泌細(xì)胞。2.研究轉(zhuǎn)染后的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞能否穩(wěn)定表達(dá)胰島素及其在低糖和高糖環(huán)境下的胰島素分泌情況。
　　方法:1.RT-PCR法擴(kuò)增人胰島素基因，并構(gòu)建含有人胰島素基因的真核表達(dá)重組載體PcDNA3.1-hINS。2.從SD大鼠腹股溝區(qū)獲得皮下脂肪墊，經(jīng)離心消化和貼壁培養(yǎng)獲得脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，并通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)鑒定CD34、CD44、CD45、CD90、CD106和CD11b的

2、表達(dá)。3.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，分別收集1d、6d、12d、18d的培養(yǎng)基液，轉(zhuǎn)染后18d行葡萄糖刺激試驗(yàn)，RT-PCR法測(cè)未轉(zhuǎn)染組、空載體組和重組載體組的胰島素mRNA轉(zhuǎn)錄，ELISSA法測(cè)未轉(zhuǎn)染組、空載體組、重組載體組和葡萄糖刺激試驗(yàn)中高糖組與低糖組的胰島素表達(dá)，并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:1.流式細(xì)胞學(xué)鑒定脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞:CD44、CD90、CD106表達(dá)陽(yáng)性，CD34、CD45、CD11b表達(dá)陰性。2.RT-PCR法測(cè)重組載體

3、組均有胰島素mRNA轉(zhuǎn)錄，未轉(zhuǎn)染組和空載體組均無(wú)轉(zhuǎn)錄。3.ELISSA法測(cè)胰島素分泌量:重組載體組(1d、6d、12d、18d)均與對(duì)照組（未轉(zhuǎn)染組）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)，空載體組與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，其中，重組載體組中1d與6d、12d、18d均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.01)，而6d、12d、18d之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，葡萄糖刺激試驗(yàn)中高糖組與低糖組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　結(jié)論:脂肪