杜仲對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞及OPG-RANKL比值的影響.pdf

1、杜仲是我國名貴滋補(bǔ)藥材，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎、降血壓、久服輕身耐勞之功效，近些年來國內(nèi)外學(xué)者對(duì)杜仲進(jìn)行了深入的研究，發(fā)現(xiàn)杜仲對(duì)骨質(zhì)疏松癥具有積極的防治效果，但杜仲對(duì)于骨質(zhì)疏松癥的研究多停留于對(duì)成骨細(xì)胞增殖和分化效果的觀察和體內(nèi)效果觀察，而杜仲對(duì)于骨質(zhì)疏松癥的防治機(jī)制的研究卻少有涉及。本實(shí)驗(yàn)著眼于杜仲對(duì)骨質(zhì)疏松癥防治機(jī)制的研究，應(yīng)用杜仲乙醇提取液培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細(xì)胞，觀察杜仲對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的增殖和分化成熟作用和杜仲

2、對(duì)OPG/RANKL比值的作用，為杜仲基于OPG/RANKL/RANK信號(hào)通路治療骨質(zhì)疏松癥提供理論基礎(chǔ)。
　　 本實(shí)驗(yàn)分為二個(gè)部分，第一部分為杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖和分化的研究，第二部分為杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的OPG/RANKL比值的影響的研究。
　　 在第一部分杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的分化和增殖的研究中，首先用MTT法確定杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨

3、細(xì)胞的適宜濃度區(qū)間，并確定應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)的終濃度。其次用高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細(xì)胞，再次用MTT法確定杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的增殖作用。然后用高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細(xì)胞，檢測(cè)ALP觀察杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的分化作用。最后用茜素紅染色法鏡下觀察高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的鈣化作用。
　　 第二

4、部分中首先用RT-PCR法觀察，高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的OPG和RANKL的轉(zhuǎn)入情況，進(jìn)一步用ELISA法觀察杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的OPG和RANKL的表達(dá)情況，并確定杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞OPG/RANKL比值的影響。
　　 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞的適宜濃度區(qū)間為10-1～10-3mg/mL，而杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-

5、E1成骨細(xì)胞的增殖和分化研究發(fā)現(xiàn)，高、中、低不同濃度的杜仲乙醇提取液均可促進(jìn)MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖和分化成熟，且均表現(xiàn)出濃度依賴性。第二部分對(duì)OPG/RANKL比值的研究發(fā)現(xiàn)，杜仲乙醇提取液不僅可以從轉(zhuǎn)入過程對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞促進(jìn)OPG、抑制RANKL的作用，而且可以對(duì)于OPG和RANKL的表達(dá)也有促進(jìn)和抑制作用，并且對(duì)于OPG/RANKL的比值有上調(diào)作用。
　　 通過本實(shí)驗(yàn)可知，杜仲乙醇提取液對(duì)MC3T3-E1成