精原細(xì)胞介導(dǎo)法制備轉(zhuǎn)基因綿羊以及后代肉品質(zhì)測(cè)定.pdf

1、骨骼肌是目前肉羊育種中的重要經(jīng)濟(jì)性狀，成肌調(diào)節(jié)因子(Myogenic regulatory factors，MRFs)負(fù)責(zé)調(diào)控整個(gè)骨骼肌的發(fā)生過(guò)程，MyoG是MRFs家族中唯一在所有骨骼肌細(xì)胞中均有表達(dá)的基因，在中胚層成肌細(xì)胞遷移至靶組織及完成增殖后肌管的形成過(guò)程中起調(diào)控作用，其成肌分化作用是其它MRFs家族成員無(wú)法代替的。本研究通過(guò)精原細(xì)胞介導(dǎo)法制備MyoG綿羊并對(duì)轉(zhuǎn)基因后代進(jìn)行肉質(zhì)分析，旨在驗(yàn)證該方法制備轉(zhuǎn)基因綿羊的可行性，同時(shí)也為

2、生產(chǎn)實(shí)踐提供參考依據(jù)，為社會(huì)帶來(lái)一定的經(jīng)濟(jì)效益。
　　首先，通過(guò)精原細(xì)胞介導(dǎo)法，將攜帶有MyoG的重組載體轉(zhuǎn)入3只第一批成年公羊睪丸內(nèi)，單側(cè)注射。注射40天后，摘取公羊睪丸，從附睪中采集精液，通過(guò)對(duì)綿羊精液涂片檢查、睪丸切片觀察、精子基因組DNA經(jīng)PCR檢測(cè)、精子總蛋白經(jīng)Western blot檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到30％，初步驗(yàn)證通過(guò)精原細(xì)胞介導(dǎo)法可以高效的將外源基因MyoG轉(zhuǎn)進(jìn)綿羊精子中。
　　基于上述成熟的方法體

3、系，再次注射3只公羊，然后分別將公羊放入三個(gè)母羊圈中，每個(gè)圈大約10頭母羊，進(jìn)行自然交配，獲得48頭G1代羔羊，經(jīng)過(guò)DNA和蛋白水平檢測(cè)，最終獲得1頭轉(zhuǎn)基因個(gè)體，陽(yáng)性率為2.08％，將后代進(jìn)行屠宰，對(duì)后代的屠宰性能、肉品質(zhì)以及肌肉纖維數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)MyoG過(guò)表達(dá)綿羊的肌纖維數(shù)高于對(duì)照組，而且屠宰性能跟陰性個(gè)體相比也有所提高，通過(guò)對(duì)肌肉的肉色、pH值、剪切力、蒸煮損失等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)MyoG過(guò)表達(dá)綿羊的肉品質(zhì)與陰性個(gè)體相比也有