移植物熱缺血影響大鼠小腸移植排斥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討移植物熱缺血再灌注損傷對(duì)大鼠小腸排斥反應(yīng)的影響及其作用機(jī)制。 方法：利用顯微外科技術(shù)構(gòu)建同系和異系大鼠異位及二期原位小腸移植模型。觀察行原位小腸移植受體的生存率并在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)獲取移植物及血標(biāo)本行常規(guī)病理學(xué)檢查，同時(shí)檢測(cè)受體大鼠血漿中D-乳酸和DAO的含量；在異位小腸移植術(shù)后第1天、第2天連續(xù)獲取移植物，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)移植物內(nèi)TLR-4、NF-κB表達(dá)定位及強(qiáng)度，應(yīng)用QRt-PCR技術(shù)檢測(cè)移植物內(nèi)TLR-4mRN

2、A轉(zhuǎn)錄水平并于術(shù)后第2天獲取受體大鼠腹腔引流淋巴結(jié)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其中CD103、CD86雙陽(yáng)性細(xì)胞的百分率；在異位小腸移植術(shù)后第3天、第5天、第7天連續(xù)獲取移植小腸，常規(guī)病理學(xué)檢查進(jìn)行排斥反應(yīng)評(píng)分的判定并行CD8+免疫組化染色觀察移植物內(nèi)CD8+細(xì)胞的浸潤(rùn)；利用異位移植術(shù)后第5天所獲移植物標(biāo)本檢測(cè)IFN-γ、IL-4的mRNA轉(zhuǎn)錄水平并應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡對(duì)移植物內(nèi)IgG2aIgG1的表達(dá)情況進(jìn)行觀察。 結(jié)果：1.同系移植

3、組術(shù)后第14天隨著熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，受體的存活時(shí)間縮短，其中W0組、W30組、W60組的存活時(shí)間無(wú)顯著性差異；異系移植組術(shù)后第7天隨著熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，受體的存活時(shí)間縮短，其中W0組與W30組的存活時(shí)間無(wú)顯著性差異。 2.同系移植組術(shù)后第14天隨熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，受體血漿D乳酸、DAO的含量升高；異系移植組術(shù)后第5天血漿D乳酸和DAO的含量隨熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而升高。 3.在術(shù)后第1天，TLR-4主要表達(dá)在移植物粘膜上皮，

4、相同熱缺血時(shí)間組間無(wú)顯著性差異，隨熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)強(qiáng)度增加；在術(shù)后第2天，TLR-4主要表達(dá)在移植小腸固有層內(nèi)單個(gè)核細(xì)胞(以單核細(xì)胞為主)，相同熱缺血時(shí)間組間無(wú)顯著性差異，隨熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)強(qiáng)度增加。 4.TLR-4陽(yáng)性單個(gè)核細(xì)胞數(shù)目、成熟樹(shù)突細(xì)胞百分率隨著熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而升高并與小腸粘膜損傷評(píng)分呈明顯正相關(guān)。 5.術(shù)后第3天，W60組可見(jiàn)明顯的CD8+細(xì)胞浸潤(rùn)，與W0組間有顯著性差異；術(shù)后第5天，各組間CD8

5、+細(xì)胞數(shù)目有顯著性差異，表現(xiàn)為隨熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)移植物內(nèi)CD8+細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)目呈逐漸增高。 6.術(shù)后第3天與術(shù)后第5天排斥反應(yīng)評(píng)分在W0組和W30組無(wú)顯著性差異，而在W60組則具有顯著性差異；術(shù)后第5天各組間排斥反應(yīng)評(píng)分具有顯著性差異，隨熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)排斥反應(yīng)評(píng)分增高。 7.術(shù)后第5天IFN-γ和IL-4mRNA轉(zhuǎn)錄水平隨著熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，組間具有顯著性差異，其變化趨勢(shì)與移植物排斥反應(yīng)評(píng)分呈正相關(guān)。 8.

6、術(shù)后第5天移植物內(nèi)IgG2a和IgG1的表達(dá)水平隨著熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，組間具有顯著性差異，其變化趨勢(shì)與移植物排斥反應(yīng)評(píng)分呈正相關(guān)。 結(jié)論：1.在同系小腸移植中，移植物可以耐受60分鐘的熱缺血；在未應(yīng)用免疫抑制劑的情況下，同種異體移植物短時(shí)間內(nèi)可以耐受30分鐘的熱缺血。 2.熱缺血再灌注損傷使移植小腸的通透性升高、屏障功能降低。 3.小腸粘膜上皮作為參與TLR-4反應(yīng)的細(xì)胞之一，在熱缺血再灌注損傷中可能是最早