影響羥基磷灰石納米顆粒DNA轉染率因素的研究.pdf

1、目的:研究羥基磷灰石納米顆粒介導DNA轉染的影響因素。
　　 方法:觀察聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)等表面活性劑處理的羥基磷灰石納米顆粒(nanoparticle hydroxyapatite,簡稱nHA)(以下簡稱PEI-nHA)混懸液在室溫下的懸浮穩(wěn)定性;用PEI-nHA與攜帶CX26基因的質粒DNA形成的復合物轉染Hela細胞。在轉染過程中,通過分別改變四個重要實驗條件(PEI-nHA濃度、DNA

2、量、細胞接種數(shù)量、共轉染時間)的參數(shù),觀察基因轉染效率的變化;不同的基因載體(未經(jīng)修飾的nHA、PEI-nHA、PEI)與攜帶CX26基因的質粒DNA形成的復合物轉染Hela細胞,觀察轉染效率。
　　 結果:PEI-nHA配置成不同濃度的混懸液在室溫下靜置24小時后觀察,具有良好的懸浮穩(wěn)定性。靜置2個月后觀察,濃度為≥1000μg/ml的PEI-nHA懸浮穩(wěn)定性良好,濃度≤500μg/ml的可見分層。PEI-nHA轉染質粒DNA

3、研究結果:1)PEI-nHA最佳濃度為250μg/ml;2)DNA最佳量為2μg;3)Hela細胞接種按4x105計數(shù)較適宜;4)共轉染最佳時間為6小時。未經(jīng)修飾的nHA轉染率在10％左右;PEI-nHA的轉染率在28％左右;PEI的轉染率在55％左右。
　　 結論:1.經(jīng)PEI修飾后的nHA載體具有良好的分散性和懸浮穩(wěn)定性;高濃度的PEI-nHA懸浮穩(wěn)定性較低濃度的PEI-nHA;懸浮穩(wěn)定性好,提示液相PEI-nHA應以高濃度