黃芪多糖對樹突狀細胞表型及功能成熟的影響.pdf

1、背景和目的:樹突狀細胞(DC)因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名，它是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強大的專職抗原提呈細胞(APC)，參與抗原的攝取、加工及提呈，是機體免疫反應的始動者，在誘導初次免疫應答過程中具有獨特的地位，由于它在機體的抗感染免疫及抗腫瘤免疫應答中的作用極其重要而備受重視，成為近年來免疫學研究的熱點。 黃芪是一種傳統(tǒng)的補益類中藥，味甘、性溫，含有多種生物活性物質(zhì)，其中多糖成分的免疫活性尤為突出，它能夠提高細胞免疫及

2、體液免疫，增強免疫功能低下模型小鼠的免疫功能，并對細胞因子有一定的調(diào)節(jié)作用。但是目前還沒有黃芪多糖(ASP)影響樹突狀細胞成熟的研究報道。本實驗通過體外試驗研究黃芪多糖對樹突狀細胞的功能調(diào)節(jié)的機制，為進一步闡明黃芪多糖的免疫學活性提供依據(jù)。 材料和方法: 1.小鼠骨髓來源樹突狀細胞的培養(yǎng)：小鼠骨髓細胞在含有GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，于第三天換液，第五天應用免疫磁珠分離系統(tǒng)純化得到樹突狀細胞。

3、 2.流式細胞儀檢測DC表面分子CD11c和MHCⅡ類分子的表達：應用PE標記的抗MHCⅡ類分子(I-A/I-E)單克隆抗體和FITC標記的抗CD11c單克隆抗體對DC進行免疫熒光標記后用流式細胞儀分析熒光強度。 3.流式細胞儀檢測DC的吞噬功能：DC收集后加入1mg/mlFITC-dextran分別于37℃和4℃溫育1h，緩沖液洗兩遍后用流式細胞儀分析熒光強度。 4.應用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測DC培養(yǎng)液中白細胞介

4、素-12(IL-12)的含量：收集DC，離心，取上清液加樣于己包被了小鼠IL-12抗體的試劑盒平板孔內(nèi)，試驗終止后用酶標儀測450nm吸光度。5.掃描電鏡觀察DC表面的超微結(jié)構(gòu)：收集DC，按常規(guī)掃描電鏡制樣流程處理后觀察DC表面的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果:本實驗應用小鼠骨髓來源的DC，通過體外實驗證明了黃芪多糖能夠提高DC表面分子CD11c和MHCⅡ類分子的表達，并且呈黃芪多糖濃度依賴性；空白組DC的吞噬功能很強，LPS陽性對照組DC和

5、黃芪多糖實驗組DC吞噬功能都明顯下降；黃芪多糖能夠促進DCIL-12的表達；電鏡觀察DC的超微結(jié)構(gòu)，可見黃芪多糖實驗組DC突起增多，形態(tài)上更加成熟。 結(jié)論: 1.黃芪多糖能夠上調(diào)樹突狀細胞表面MHCⅡ類分子和共刺激分子的表達。 2.黃芪多糖抑制樹突狀細胞對FITC-dextran的吞噬。 3.黃芪多糖能夠促進樹突狀細胞分泌IL-12。 4.黃芪多糖能夠促進樹突狀細胞形態(tài)學的成熟。 綜上所述