早產胎盤miRNA表達譜構建及miR-182-5p在早產中作用的探討.pdf

1、早產(Preterm Birth，PTB)定義為孕期小于37周或從末次月經第一天開始計算少于259天分娩。早產在我國的發(fā)生率約為8％，并且有逐年上升的趨勢，75％的圍產兒死亡和50％的異常與早產有關，是圍產兒發(fā)病和死亡的首要原因。早產的發(fā)生機制尚不完全清楚，目前認為，早產是多種因素相互作用所致的一種綜合征，與遺傳、感染、孕酮水平、多胎妊娠、宮頸長度、胎盤異常、年齡、營養(yǎng)狀況、凝血因素等有關。
　　近年來，研究發(fā)現(xiàn)微小RNA(mic

2、roRNA，miRNA)水平及基因3'非翻譯區(qū)（3'-UTR）上miRNA作用靶點序列多態(tài)與早產、先兆子癇、流產以及胎兒畸形等不良妊娠結局有關。本研究旨在構建早產胎盤差異表達的miRNA圖譜，篩選早產相關的miRNA，并探討其在早產中的作用。
　　方法:
　　2013年2月-2013年10月期間分娩的早產兒16例為病例組，同期健康足月產兒18例為對照組，取胎盤組織。通過非標記miRNA芯片技術構建早產胎盤組織miRNA表達譜

3、，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)進行驗證。構建鋅指E-box結合同源框2(Zinc finger E-box binding homeobox2，ZEB2)和人凝血因子(Ⅻ)A1多肽（Factor(Ⅻ)A，F(xiàn)13A1）的psiCHECK2野生型和突變型的載體，通過雙熒光素酶報告基因檢測、原位雜交等方法探討miR-182-5p與ZEB2和F13A1基因的互作關系。
　　結果:
　　1.對照組胎盤和早產胎盤中有11

4、38種miRNAs在胎盤中表達，其中miR-4251、miR-517c-3p和miR-23b-3p等miRNAs在胎盤中表達最高，miR-1292-3p、miR-4632-5p和miR-5787等miRNAs表達最低。miRNA芯片結果顯示44種miRNAs在早產胎盤組織和對照組胎盤組織中差異表達，其中上調表達的33個，下調表達的11個，miR-493-3p是下調表達倍數(shù)最多的miRNA，下調倍數(shù)為2.77倍，miR-1322為上調表達

5、最多的miRNA，上調倍數(shù)為9.81。RT-PCR驗證結果與芯片結果一致。
　　2.實時熒光定量PCR結果顯示miR-182-5p在早產胎盤組織中表達水平顯著增加，采用原位雜交結果顯示miR-182-5p在胎盤組織細胞質中廣泛表達。
　　3.采用在線軟件預測miR-182-5p的靶基因為ZEB2和F13A1。雙熒光素酶活性實驗結果顯示在HTR-8/SVneo細胞中miR-182-5p直接作用于ZEB2和F13A1基因，并且起

6、抑制作用。采用實時熒光定量PCR方法檢測，與足月產胎盤相比，早產胎盤組織的ZEB2和F13A1的mRNA未見差異表達。
　　結論:
　　1.早產胎盤組織中存在差異表達的miRNAs，這些差異表達的miRNAs在早產中的功能還需要進一步的研究。
　　2.miR-182-5p在早產胎盤組織中表達上調，在離體細胞中miR-182-5p對ZEB2和F13A1基因起抑制作用，但是在在體組織中，在miR-182-5p增高的早產胎盤