玉米花粉多糖對大鼠腸絨毛微血管內皮細胞幾種免疫相關因子的影響.pdf

1、本試驗目地旨在探討玉米花粉多糖(PAM)的免疫增強作用機制，同時借此探討機體免疫調節(jié)系統(tǒng)的基本工作模式。基本方法是監(jiān)測大鼠腸絨毛微血管內皮細胞(REC)培養(yǎng)物中受一定濃度的PAM刺激后分泌免疫相關因子NO、IL-6、ET-1的濃度變化。首先提取PAM并進行純化和含量測定。參考植物多糖提取的一般工藝進行改進，直接使用乙醇回流，然后再使用水提醇沉法。最后通過葡聚糖凝膠柱純化，收集Molish反應陽性部分干燥備用。其次培養(yǎng)REC并進行純化，用

2、間接免疫熒光法等鑒定均顯示陽性，由此確認得到內皮細胞。參考哺乳動物正常血糖水平，設計PAM原始工作濃度為100μg/ml，約為正常血糖水平的600～1000分之一，實際作用濃度在4～8μg/ml。當細胞層生長達80﹪時，消化并且收獲細胞，做細胞計數(shù)，稀釋到1×105/ml備用。取新細胞培養(yǎng)板，按照每孔0.5ml進行接種，繼續(xù)培養(yǎng)。將預先升至室溫的PAM溶液按照20μl的設計加入到各組細胞培養(yǎng)孔中。按照設計時間取樣，經過3000rpm×5

3、min離心，收取上清液冷凍存放備檢。對樣品中的一氧化氮采用硝酸還原酶法檢測。結果試驗組中的NO含量在可觀察到的7小時以內均明顯高于對照組，而且呈現(xiàn)劑量依賴性，但隨時間延長，NO含量有逐漸下降的趨勢。表明PAM的刺激導致REC分泌NO突然增加，然后逐漸減少；即PAM對REC的作用之一是導致REC分泌NO含量顯著增加。對樣品中的IL-6采用試劑盒ELISA法測定。試驗組仍然明顯高于對照組，且呈現(xiàn)相同的變化規(guī)律。對樣品中ET-1采用試劑盒EL

4、ISA法測定。從第48小時后試驗組均比對照組高，隨時間延長呈明顯上升趨勢。綜合分析試驗結果，PAM刺激初期，REC呈爆發(fā)式分泌大量NO后逐漸減少NO分泌量；然后分泌較多的IL-6；在持續(xù)大約48小時左右，開始增加分泌ET-1并逐漸加強。從這些細胞因子的生理作用分析，受PAM刺激后，首先表現(xiàn)為血管壁的擴張，細胞間隙加大，促進炎性反應發(fā)生；然后表現(xiàn)為血管壁的收縮，控制漏出液，減輕炎性反應程度，即具有免疫增強作用的PAM接觸到REC時會使RE