RNAi沉默TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細胞功能影響的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文對RNAi沉默TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細胞功能影響進行了實驗研究。本文分為兩個部分:
   第一部分體外培養(yǎng)正常和瘢痕疙瘩成纖維細胞TGF-β/Smads信號表達的差異。
   目的:探討體外培養(yǎng)正常及瘢痕疙瘩中成纖維細胞TGF-β/Smads信號表達的差異。
   方法:采用組織塊細胞培養(yǎng)法,培養(yǎng)正常及瘢痕組織成纖維細胞,用RT-PCR方法檢測細胞中TIEG、Smad2、Smad7以及α-SMA、colla

2、genⅠ mRNA表達水平。
   結果:RT-PCR結果顯示:(1)正常皮膚成纖維細胞的TIEG mRNA表達水平較低,而在瘢痕疙瘩成纖維細胞中,則有較高水平的TIEGmRNA的表達(P<0.05);(2)瘢痕疙瘩成纖維細胞與正常皮膚成纖維細胞比較,瘢痕疙瘩中表達Smad2 mRNA增強(P<0.05),表達Smad7mRNA減弱(P<0.05);(3)瘢痕疙瘩比正常皮膚成纖維細胞α-SMAmRNA和CollagenⅠ mRN

3、A的表達增強(P<0.05)。
   結論:瘢痕疙瘩中的成纖維細胞表達TIEG增高,并活化TGF-β/Smad信號通路,下調內源性Smad7并上調Smad2基因轉錄,并可促進成纖維母細胞轉分化和細胞外基質合成。
   第二部分 pSUPER.gfp/TIEG干擾質粒對瘢痕疙瘩成纖維細胞TGF-β/Smads的影響。
   目的:探討TIEGsiRNA表達載體pSUPER.gfp/TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細胞TGF

4、-β/Smads信號通路基因表達的影響。
   方法:采用小分子RNA干擾(RNAi)技術,用脂質體將pSUPER.gfp/TIEG轉染原代培養(yǎng)的人瘢痕疙瘩成纖維細胞,應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)的方法檢測阻礙內源性TGF-β/Smads信號轉導的條件下瘢痕疙瘩成纖維細胞TIEG、Smad2、Smad7以及α-SMA、collagenⅠ mRNA表達水平。
   結果:pSUPER.gfp/TIEG可有效干擾瘢

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