RNAi沉默TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細胞功能影響的實驗研究.pdf

1、本文對RNAi沉默TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細胞功能影響進行了實驗研究。本文分為兩個部分：
　　 第一部分體外培養(yǎng)正常和瘢痕疙瘩成纖維細胞TGF-β/Smads信號表達的差異。
　　 目的：探討體外培養(yǎng)正常及瘢痕疙瘩中成纖維細胞TGF-β/Smads信號表達的差異。
　　 方法：采用組織塊細胞培養(yǎng)法，培養(yǎng)正常及瘢痕組織成纖維細胞，用RT-PCR方法檢測細胞中TIEG、Smad2、Smad7以及α-SMA、colla

2、genⅠ mRNA表達水平。
　　 結果：RT-PCR結果顯示：(1)正常皮膚成纖維細胞的TIEG mRNA表達水平較低，而在瘢痕疙瘩成纖維細胞中，則有較高水平的TIEGmRNA的表達(P＜0.05)；(2)瘢痕疙瘩成纖維細胞與正常皮膚成纖維細胞比較，瘢痕疙瘩中表達Smad2 mRNA增強(P＜0.05)，表達Smad7mRNA減弱(P＜0.05)；(3)瘢痕疙瘩比正常皮膚成纖維細胞α-SMAmRNA和CollagenⅠ mRN

3、A的表達增強(P＜0.05)。
　　 結論：瘢痕疙瘩中的成纖維細胞表達TIEG增高，并活化TGF-β/Smad信號通路，下調內源性Smad7并上調Smad2基因轉錄，并可促進成纖維母細胞轉分化和細胞外基質合成。
　　 第二部分 pSUPER.gfp/TIEG干擾質粒對瘢痕疙瘩成纖維細胞TGF-β/Smads的影響。
　　 目的：探討TIEGsiRNA表達載體pSUPER.gfp/TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細胞TGF

4、-β/Smads信號通路基因表達的影響。
　　 方法：采用小分子RNA干擾(RNAi)技術，用脂質體將pSUPER.gfp/TIEG轉染原代培養(yǎng)的人瘢痕疙瘩成纖維細胞，應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)的方法檢測阻礙內源性TGF-β/Smads信號轉導的條件下瘢痕疙瘩成纖維細胞TIEG、Smad2、Smad7以及α-SMA、collagenⅠ mRNA表達水平。
　　 結果：pSUPER.gfp/TIEG可有效干擾瘢