甲減大鼠腎臟脂質過氧化及GPx、SOD基因水平的實驗研究.pdf

1、目的： 1 觀察甲減Wistar大鼠腎臟代表抗氧化能力的酶谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)的組織學水平，以及過氧化損傷致組織中丙二醛(MDA)及組織細胞膜Na<'+>，K<'+>-ATPase、Ca<'2+>-ATPase水平的變化。 2 觀察甲減大鼠腎臟GPx、SOD-mRNA的基因表達水平。 方法： 本研究在成功復制甲減動物模型的基礎上，利用組織學、生物化學、分子生物學RT-PC

2、R方法，系統(tǒng)研究甲減大鼠腎臟過氧化損傷機制。本研究分五部分： 1 甲減動物模型的復制：選用健康斷乳一個月，體重在120-140g的Wistar大鼠，雌雄各半，隨機分為甲減組(ItYPO)和甲功正常組既對照組(EU)，每組10只。HYPO組動物飼以低碘地區(qū)的糧食(玉米、小麥、黃豆)制成的低碘飼料并添加動物必需的無機鹽和維生素，平均碘含量小于50μg/kg，EU組飼以正常鼠料，上述飼料中各種糧食的配比是相同的，以保證飼料的主要營養(yǎng)素

3、相同，只是碘含量不同；HYPO組飲用去離子水(水中碘含量為0μg/L)， EU組飲用自來水，飼養(yǎng)24周。 2 甲狀腺組織形態(tài)學：常規(guī)HE染色，觀察甲狀腺形態(tài)學變化。 3 血清學測定：分別留取兩組動物的不抗凝全血4ml，離心，吸取血清約2ml，利用競爭結合放射免疫分析方法測定血清TT<,3>、TT<,4>、FT<,3>、FT<,4>的水平。 4 腎臟組織勻漿過氧化損傷相關酶學測定：上述大鼠飼養(yǎng)24周，取腎臟組織勻

4、漿，利用生物化學的方法分別測定組織中GPx、SOD、Na<'+>，K<'+>-ATPase、Ca<'2+>-ATPase的活性及MDA的表達水平。 5 腎臟組織過氧化損傷相關酶的基因表達：取-80℃保存的新鮮腎臟組織，利用Trizol一步法提取總RNA，逆轉成cDNA，應用RT-PCR的方法分別擴增目的基因GPx、SOD，利用管家基因β-actin作為內參照，1％瓊脂糖凝膠電泳后應用MIAS-5.0進行灰度測量，結果取目的基因與

5、內參照的比值進行半定量分析。 結果： 1 對大鼠甲狀腺組織形態(tài)學觀查顯示，甲減組甲狀腺呈彌漫增生性甲腫改變，甲狀腺濾泡增生，體積較小，濾泡腔變小，形狀不規(guī)則，腔內膠質顯著減少或缺如，濾泡上皮細胞增生肥大，呈復層高柱狀，胞漿淡染，呈透明狀，部分區(qū)域可見上皮細胞空泡變性，細胞項緣邊界不完整，甚至細胞結構消失，濾泡壁破壞。 2 甲減組TT<,3>、TT<,4>、FT<,3>、FT<,4>均明顯下降(P<0.01)。提示

6、同一種動物通過食用含碘量很低的飼料及飲用水，可致甲狀腺功能減退，故低碘飲食使甲減動物模型復制成功。 3 與甲功正常組相比，甲減組動物腎臟組織中GPx活性顯著升高(P<0.05)，SOD活性顯著下降(P<0.05)；膜標志酶Na<'+>，K<'+>-ATPase、Ca<'2+>-ATPase活性明顯下降(P<0.05)，MDA含量顯著增加(P<0.05)。結果表明甲狀腺功能減退癥動物腎臟中，盡管GPx升高可以抵消過多的自由基，但S

7、OD的下降超過GPx代償性的升高作用，導致過氧化產物MDA升高，同時膜標志酶Na<'+>，K<'+>-ATPase、Ca<'2+>-ATPase功能的下降，造成腎臟組織的過氧化損傷。 4 與甲功正常組相比，甲減組動物腎臟組織中GPx的基因表達水平略高，但無統(tǒng)計學意義，SOD表達水平明顯下降(P<0.05)。上述與組織水平上相似的結果進一步在分子水平上證實了甲減組動物腎臟存在過氧化損傷。 結論： 1 碘不足導致