鹽酸小檗堿對高脂飲食誘導的SD大鼠非酒精性脂肪肝的療效及機制研究.pdf

1、目的：
　　通過高脂飼料誘導的非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease NAFLD)Sprague-Dawley(SD)大鼠動物模型，觀察鹽酸小檗堿對非酒精性脂肪肝的治療效果；并篩選NAFLD異常表達的脂代謝相關基因，及其與脂代謝紊亂的關系，從表觀遺傳學探討基因表達異常的機制及鹽酸小檗堿的作用機制。
　　方法：
　　6周齡SD大鼠，隨機分為正常飲食組、高脂飲食組，給予相應飲食飼養(yǎng)

2、8周，高脂飲食飼養(yǎng)組大鼠經肝臟病理切片確認為NAFLD模型成功后，高脂飲食組再次隨機分為鹽酸小檗堿(Berberine，BBR)干預組及溶劑對照組。給予相應藥物連續(xù)灌胃16周，藥物治療期間每周測體重，計算進食情況，每月測空腹血糖、胰島素、甘油三酯(triglyceride，TG)、膽固醇(Cholestorel，TC)、低密度脂蛋白膽固醇(Low densitylipoprotein cholestorel，LDL-c)、高密度脂蛋白膽

3、固醇(High density lipoproteincholestorel，HDL-c)、谷丙轉氨酶(Alanine transaminase，ALT)、谷草轉氨酶(AST)，藥物干預第16周末行腹腔內糖耐量實驗(Intraperitoneal glucose tolerancetest，IPGTT)，第二天處死，收集血及組織標本，肝組織行冰凍切片蘇丹Ⅲ脂肪染色及肝臟勻漿測TG含量。提取三組肝臟RNA，采用real-time PCR對

4、脂代謝關鍵基因進行定量檢測mRNA水平。肝臟組織提取DNA，進行亞硫酸鹽處理，采用PCR產物測序及亞克隆/測序方法對real-time PCR定量檢測出正常飲食對照組與高脂飲食對照組表達差異的基因啟動子區(qū)域進行DNA甲基化程度。采用快速蛋白液相色譜(Fast protein liquidchromatography，FPLC)分析了血清脂蛋白成分的變化。
　　結果：
　　高脂飲食飼養(yǎng)8周能誘導SD大鼠肝臟脂質沉積，成功建立N

5、AFLD模型。BBR干預16周能明顯減輕NAFLD大鼠體重、內臟脂肪總量及肝臟的濕重，改善脂代謝紊亂，從病理組織學及提取肝臟TG含量的結果表明BBR能改善高脂飲食誘導的脂肪肝，并且改善胰島素敏感性。高脂飲食對照組大鼠肝臟存在脂代謝相關基因如微粒體甘油三酯轉運蛋白(MTTP)、低密度脂蛋白受體(LDLR)肉堿棕櫚酰轉移酶(CPT1α)及硬脂酰輔酶A去飽和酶-1(SCD-1)的表達異常，且BBR能夠糾正這些基因的表達異常及增加血清VLDL-

6、TG水平。對這些基因的表達改變的機制進行研究，結果表明高脂飲食飼養(yǎng)大鼠肝臟MTTP啟動子區(qū)域平均甲基化水平和5個CpG位點中的3個(-174，-113及-20)甲基化程度顯著高于正常飲食對照組。并且BBR顯著減低這些CpG位點的甲基化程度(最多至30％)。相關性分析結果表明-113和-20CpG位點的甲基化程度與MTTP mRNA水平呈顯著負相關。這些研究結果提示高脂飲食導致肝臟MTTP基因啟動子區(qū)域高度甲基化，影響MTTP的轉錄，從而

7、引起MTTP mRNA水平的下降。另外，選定調控LDLR和CPT-1α轉錄的關鍵啟動子區(qū)域序列CpG位點沒有觀察甲基化的修飾，推測LDLR和CPT-1α的表達調控可能受到其他機制的影響如組蛋白修飾等。
　　結論：
　　本研究發(fā)現鹽酸小檗堿能夠改善高脂飲食誘導SD大鼠脂肪肝及改善胰島素敏感性。進一步研究表明，鹽酸小檗堿能夠逆轉高脂飲食誘導NAFLD大鼠肝臟脂代謝關鍵基因MTTP、LDLR、CPT-1α及SCD-1的表達異常有關