應(yīng)用代謝組學(xué)策略研究茉莉酸甲酯對(duì)三七不定根次生代謝產(chǎn)物的影響.pdf

1、三七是我國(guó)特有的貴重藥材之一，也是國(guó)際市場(chǎng)上的暢銷植物藥，具有活血化瘀、鎮(zhèn)靜止痛、滋補(bǔ)強(qiáng)壯等功效。由于生長(zhǎng)緩慢和地理?xiàng)l件的限制以及市場(chǎng)需求的不斷擴(kuò)大，導(dǎo)致資源供不應(yīng)求。為了緩解日益突出的資源短缺和需求量增加之間的矛盾，利用代謝組學(xué)策略評(píng)價(jià)優(yōu)化三七組織培養(yǎng)方法生產(chǎn)大量三七活性次生代謝產(chǎn)物成為當(dāng)務(wù)之急。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立了三七不定根液體培養(yǎng)體系。因此，研究?jī)?yōu)化三七不定根組織培養(yǎng)生產(chǎn)大量次生代謝產(chǎn)物具有可行性和迫切性。本文首先建立了基于UPLC

2、-MS的代謝組學(xué)分析方法，然后分別分析比較了茉莉酸甲酯刺激的三七不定根，三七不定根，大田三七根和花蕾之間的次生代謝差異，初步證明了茉莉酸甲酯作為誘導(dǎo)劑的有效性，進(jìn)一步研究了茉莉酸甲酯對(duì)三七不定根的影響，為繼續(xù)深入研究奠定了基礎(chǔ)。 研究結(jié)果如下： 1. 首次建立了UPLC-MS和PCA，PLS-DA結(jié)合的分析方法對(duì)三七次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究。與傳統(tǒng)高效液相色譜法相比，該方法全面、快速、高效而且方法的線性范圍、回收率、日內(nèi)日間

3、精密度和穩(wěn)定性均符合分析天然產(chǎn)物的測(cè)定要求。多維統(tǒng)計(jì)方法的應(yīng)用，能夠更加準(zhǔn)確的從三七次生代謝輪廓中找出關(guān)鍵活性物質(zhì)，評(píng)價(jià)三七不定根。 2. 首次利用建立的代謝組學(xué)分析方法研究三七不定根，茉莉酸甲酯刺激三七不定根，三七根和三七花蕾的次生代謝產(chǎn)物的差異，從而評(píng)價(jià)茉莉酸甲酯作為誘導(dǎo)劑對(duì)三七不定根的作用。發(fā)現(xiàn)茉莉酸甲酯對(duì)三七不定根次生代謝產(chǎn)物合成的影響非常明顯，且合成的次生代謝產(chǎn)物的比例與大田三七更加相似，確定了進(jìn)一步研究的意義。

4、 3. 研究茉莉酸甲酯對(duì)三七不定根的最佳刺激時(shí)間和加入量，并深入研究了隨時(shí)間變化，茉莉酸甲酯對(duì)三七不定根生長(zhǎng)和次生代謝產(chǎn)物合成的影響。根據(jù)PCA得分圖上的分布發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)21天時(shí)加入400μmol/L的茉莉酸甲酯第七天能夠達(dá)到最佳的刺激次生代謝產(chǎn)物合成的作用。同時(shí)根據(jù)PLS-DA的分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)茉莉酸甲酯明顯刺激皂苷類次生代謝產(chǎn)物的合成，且對(duì)二醇型皂苷合成的作用（如人參皂苷Rb1，Rb2，Rc，Rd）大于對(duì)三醇型皂苷的作用，部分三醇型皂苷的