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文檔簡介
1、現在普遍認為阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease,AD)主要是由大腦特異區(qū)域(包括隔膜)的β淀粉樣蛋白(Aβ)的神經毒性蓄積所引起。Aβ由40-42個氨基酸肽段組成,是淀粉樣前體蛋白(APP)的裂解產物。在AD病人大腦中,活化的星形膠質細胞是神經炎斑塊的基本組成成分,并且含有Aβ碎片。星形膠質細胞是中樞神經系統(tǒng)中數量最多而且最重要的細胞,在修復大腦的正常生理功能中起重要作用,星形膠質細胞功能的紊亂可促使神經退變和神經元突
2、觸的喪失。但是,星形膠質細胞與AD的確切關系目前尚不清楚。本研究通過一系列體外實驗探討了Aβ1-42寡聚體對星形膠質細胞增殖與活化作用的影響,為體內進一步了解Aβ1-42和星形膠質細胞在AD疾病發(fā)病過程中的作用提供理論基礎,有利于進一步了解AD的發(fā)病機理。 本研究取新生一天的ICR小鼠的腦,機械分離大腦皮層,進一步分離獲得星形膠質細胞,在體外進行培養(yǎng)。原代細胞大約3-5周成熟。傳代后星形膠質細胞的形態(tài)由原漿性向纖維性轉變。通過免
3、疫組化鑒定后,發(fā)現原代星形膠質細胞的純度達到95%以上。傳代后的星形膠質細胞純度更高。在體外利用聚合后0.1μM、1μM、3μM、10μM、30μM的Aβ1-42寡聚體分別作用于星形膠質細胞3h、8h、16 h、24 h、48 h。結果發(fā)現,Aβ1-42寡聚體能夠使星形膠質細胞由原來的原漿性星形膠質細胞向纖維性轉變,同時隨著Aβ1-42寡聚體濃度增加和作用時間的延長,細胞的存活率逐漸降低。根據細胞存活率結果,我們進一步選取不同濃度(0.
4、1μM、1μM、3μM、10μM、30μM)的Aβ1-42寡聚體分別作用于星形膠質細胞,分別在8h和48 h,用ELISA法檢測了星形膠質細胞大腦衍生生長因子(BDNF)的分泌,通過RT-PCR法檢測星形膠質細胞標志物膠質纖維酸性蛋白(GFAP)和炎性因子白介素-1β(IL-1β)的表達狀況。結果表明,隨著Aβ1-42寡聚體濃度的升高(30μM)和作用時間的延長(48 h),星形膠質細胞分泌的BDNF量增多;而GFAP和IL-1β的表達
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