Methylcobalamin在背根節(jié)慢性壓迫大鼠模型上的外周鎮(zhèn)痛作用及其機制.pdf

1、背根節(jié)慢性壓迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)神經病理性痛模型能有效的模擬腰椎間盤突出,椎管狹窄和腫瘤壓迫等原因造成的臨床上常見的腰背痛和坐骨神經痛。CCD大鼠模型背根節(jié)神經元膜上離子通道表達和功能改變導致其興奮性的變化,背根節(jié)(dorsal root ganglion,DRG)有自發(fā)放電(spontaneous activity)出現(xiàn)。由于外周傳入沖動的增加,造成脊髓和

2、高位中樞的持續(xù)性興奮和敏化,導致神經病理性痛癥狀的出現(xiàn)。損傷感覺神經元胞體或軸突產生的自發(fā)放電是疼痛產生和維持的重要基礎,異位自發(fā)放電成為評價和研究鎮(zhèn)痛藥物及其機制的一種手段。
　　最近的研究發(fā)現(xiàn)methylcobalamin(MeCbl)能夠改善非特異性腰痛患者的疼痛評分,有報道指出B12單獨使用或者與B1,B6聯(lián)合其使用有助于緩解SNL的觸誘發(fā)痛,SCI和CCD模型的熱痛覺敏化。但是也有研究報道MeCbl不能改善腰椎椎管狹窄患

3、者的疼痛癥狀。因此,對于MeCbl是否具有鎮(zhèn)痛作用仍存在爭議。MeCbl是否影響初級感覺神經元的自發(fā)放電和興奮性尚不明確。本實驗在CCD模型上,研究MeCbl對神經病理性痛的作用及其機制。
　　超極化激活的內向流(Hyperpolarization-activated inward currents,Ih)存在于DRG神經元中。通過抑制神經元超極化和促進去極化調節(jié)細胞膜的興奮性。以往研究顯示DRG慢性壓迫的感覺神經元Ih電流密度增

4、加,然而,MeCbl是否影響DRG神經元Ih電流密度未見報道。
　　主要結果:
　　1.CCD大鼠表現(xiàn)雙側后足觸誘發(fā)痛和損傷側熱痛覺敏化
　　術后21d內觀察并測定CCD組和sham組雙側機械縮足閾值和熱縮足潛伏期(TWL)。與sham組相比較,CCD組雙側機械縮足閾值顯著下降(損傷側:P<0.001;對側:P<0.001,重復測量方差分析)。損傷側CCD組TWL較sham組明顯下降而對側不存在差異(損傷側:P<0.0

5、01;對側:P>0.05,重復測量方差分析)。
　　2.連續(xù)腹腔注射MeCbl明顯抑制CCD大鼠的觸誘發(fā)痛,對TWL無影響。
　　觀察長時程和短時程腹腔注射MeCbl對CCD大鼠的觸誘發(fā)痛和TWL的影響。數(shù)據顯示單次注射MeCbl在短時程不對CCD和sham組雙側機械縮足閾值和TWL產生作用(P=1.00,重復測量方差分析)。長時程中,在雙側,均是5d,10d,18d,23d和28d5個點存在差異(損傷側:P<0.05;對側

6、:P<0.01,重復測量方差分析)。長時程腹腔注射MeCbl(2.5mg/kg)在第5天開始出現(xiàn)抑制CCD大鼠雙側觸誘發(fā)痛的作用,并且有時間累積效應。雖然CCD手術前后大鼠的TWL沒有顯著降低,在長時程的觀察中,CCD大鼠的TWL維持穩(wěn)定,說明長時程腹腔注射MeCbl不影響CCD大鼠雙側TWL。
　　3.MeCbl明顯抑制CCDDRGA-類神經元的自發(fā)放電
　　在62例單纖維中,66.1％對MeCbl敏感,其中83.3%的單

7、位能在10min內洗脫恢復至基線水平,濃度從3至300μM表現(xiàn)劑量依賴效應。MeCbl(300μmol/L)對CCDA-類DRG神經元周期和非周期放電模式的自發(fā)放電均有抑制作用,兩者之間不存在差異。利用全細胞膜片鉗技術研究MeCbl對CCD大鼠離體中型DRG神經元自發(fā)放電的影響,發(fā)現(xiàn)在60s內,細胞的自發(fā)放電被完全抑制,并且洗脫10min內恢復。
　　4.MeCbl明顯抑制CCD中型DRG細胞的興奮性
　　與sham組相比,

8、CCD大鼠中型DRG神經元AP的幅值和最大上斜率都明顯增大(P<0.05,n=32,單因素方差分析)。而MeCbl顯著降低CCD中型DRG神經元的興奮性,表現(xiàn)AP幅值、AHP幅值、最大上升斜率和最大下降斜率明顯下降(P<0.01,n=34,配對t檢驗);半寬顯著增大(P<0.05,n=34,配對t檢驗)。
　　5.MeCbl明顯減小CCDDRG中型DRG細胞的Ih電流密度
　　CCD組的超極化激活的Ih電流密度較sham組顯

9、著升高(P<0.05,重復測量方差分析)。MeCbl作用于CCD和sham組DRG,明顯降低CCD組中型DRG細胞Ih電流密度而不影響sham組(P<0.05,重復測量方差分析)。
　　主要結論:
　　1.長時程腹腔注射MeCbl可明顯抑制CCD大鼠雙側觸誘發(fā)痛,不影響CCD大鼠雙側TWL;對sham大鼠機械閾值無影響。
　　2.MeCbl明顯抑制在體、離體CCDDRGA-類神經元的SA。MeCbl(300μmol/L