人子宮內膜干-祖細胞的分離、培養(yǎng)與人子宮內膜細胞異種移植效果觀察.pdf

1、背景：子宮內膜的修復、再生與子宮內膜干細胞（hESC）有關，以維持其月經和孕育受精卵的功能。臨床上有些疾病也可能與子宮內膜干細胞有關，如子宮內膜異位癥(EMS)。有學者提出了 EMS的干細胞起源學說，認為經血倒流將子宮內膜干細胞輸送到子宮腔以外的地方，這些種子在適宜的微環(huán)境下發(fā)生粘附、增殖、浸潤生長形成病灶。雖然有學者采用裸鼠進行人EMS模型的建立，但由于其免疫功能缺陷,而缺乏代表性。
　　目的：本實驗將初步分離人子宮內膜細胞（h

2、EC），并利用人子宮內膜細胞移植于ICR小鼠的一側子宮漿膜受損區(qū)，觀察異種移植是否有病灶形成。
　　方法:差速貼壁法和二次篩網法分離子宮內膜上皮和基質細胞，并分別進行低密度和挑克隆傳代培養(yǎng)，并用流式細胞儀、免疫組化進行鑒定。將分離的hEC移植在ICR小鼠一側子宮的漿膜損傷區(qū)，對側子宮作為對照，實驗分三組：第一組移植混合傳代培養(yǎng)的hEC；第二組移植新鮮消化分離的hEC；第三組移植機械分離至0.5-1mm3大小的新鮮子宮內膜微組織。各

3、組分別在2W、3W、4W處死小鼠。HE染色、免疫組化抗人ERα和CK鑒定，觀察hESC在子宮漿膜受損區(qū)的定植和局部反應情況。
　　結果：①差速貼壁和二次篩網過濾法均可初步分離上皮和基質細胞，上皮細胞呈橢圓形貼壁生長，細胞排列成鋪路石樣外觀?；|細胞呈長梭形貼壁生長，細胞排列成漩渦狀、放射狀。細胞分別低密度培養(yǎng)后均有大小兩種克隆形成，且都有幾種不同細胞形態(tài)的克隆。上皮細胞大克隆挑克隆傳代培養(yǎng)至P6開始出現老化現象，而基質細胞則傳至

4、P9開始出現生長停滯現象。免疫染色發(fā)現P5lower細胞CK-18陽性表達，ABCG2、CD90和波形蛋白表達陰性。細胞經混合傳代培養(yǎng)后流式細胞儀檢測發(fā)現SP細胞的比例逐漸減少至幾乎沒有。②混合傳代培養(yǎng)的 hEC移植后，2w、3 w、4w處死小鼠均未見病灶形成，免疫組化分析未見抗人ERα和CK表達。移植新鮮消化分離的hEC與上組同期處死小鼠可見子宮表面有結節(jié)形成，體式鏡下觀察結節(jié)呈水泡狀，HE染色可見血管及間質組織，未見腺體樣結構，免疫