NSCs與熱處理OECs聯(lián)合移植治療大鼠脊髓損傷的研究.pdf

1、目的:觀察神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)與40℃熱處理嗅鞘細(xì)胞(OECs)聯(lián)合移植治療大鼠脊髓損傷(SCI)的療效，為今后的治療策略提供參考。
　　 方法:取新生大鼠嗅球和大腦皮質(zhì)，分別用實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞培養(yǎng)方法與神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)方法提取嗅鞘細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞。移植前用溴脫氧尿苷(BrdU)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞，熱處理組嗅鞘細(xì)胞40℃條件下培養(yǎng)6小時(shí)后備用。
　　 健康清潔級(jí)成年SD大鼠，雌性，200-250g，分為:對(duì)照組（n=14）

2、、未熱處理組（n=14）、熱處理組(n=14)。制作大鼠胸10脊髓半橫斷損傷模型，術(shù)后7天分組移植平衡鹽溶液(PBS)、神經(jīng)干細(xì)胞+嗅鞘細(xì)胞懸液、神經(jīng)干細(xì)胞+熱處理嗅鞘細(xì)胞懸液，神經(jīng)干細(xì)胞與嗅鞘細(xì)胞比例1∶1，總數(shù)量為107個(gè)。
　　 整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，通過(guò)Basso-Beatie-Bresnahan(BBB)評(píng)分、爬桿計(jì)分和旋轉(zhuǎn)時(shí)間測(cè)定，對(duì)大鼠右下肢運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行檢測(cè)和比較。移植1天、2周、4周后每組隨機(jī)選擇2只大鼠，將大鼠灌注處死

3、后，分離脊髓組織，石蠟切片。通過(guò)蘇木精-伊紅（HE）染色，觀察、分析脊髓組織病理學(xué)改變。利用BrdU示蹤觀察移植的細(xì)胞的分布情況。
　　 結(jié)果:NSCs和熱處理OECs聯(lián)合移植治療的大鼠，BBB評(píng)分結(jié)果顯著提高，尤其是在移植后2周快速增長(zhǎng)，6周后評(píng)分結(jié)果進(jìn)入緩慢增長(zhǎng)期。對(duì)照組、未熱處理的BBB評(píng)分結(jié)果上升趨勢(shì)緩慢，尤以對(duì)照組為甚。熱處理組的BBB分?jǐn)?shù)在2周、4周、6周、8周、12周顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，未熱處理組(P＜

4、0.05)。移植后4周、6周爬行計(jì)分及旋轉(zhuǎn)時(shí)間測(cè)定結(jié)果表明，熱處理組肢體功能恢復(fù)結(jié)果好于其他組(P＜0.05)。熱處理組HE染色結(jié)果顯示脊髓細(xì)胞排列整齊，接近正常。BrdU標(biāo)記結(jié)果顯示損傷組織區(qū)域可發(fā)現(xiàn)移植細(xì)胞，提示移植細(xì)胞參與脊髓損傷修復(fù)。
　　 結(jié)論:
　　 1.NSCs聯(lián)合熱預(yù)處理OECs治療脊髓損傷效果優(yōu)于NSCs聯(lián)合未熱預(yù)處理OECs治療效果。
　　 2.經(jīng)熱預(yù)處理OECs上清液誘導(dǎo)后，NSCs向神經(jīng)元