孕期弓形蟲感染誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞亞群的偏移及其對不良妊娠的影響.pdf

1、目的：宮內(nèi)感染導(dǎo)致胚胎畸形的病原生物通常稱為“TORCH”,弓形蟲(Toxoplasma gondii)被列為這五大病原體之首。母體的病原體可經(jīng)血流通過胎盤在宮內(nèi)感染胎兒,引起先天性弓形蟲病,使孕婦出現(xiàn)流產(chǎn)、死產(chǎn)、早產(chǎn)或增加妊娠合并癥,構(gòu)成圍產(chǎn)期的一種嚴(yán)重的不良妊娠結(jié)局。宿主受弓形蟲感染的獲得性免疫應(yīng)答,主要通過誘導(dǎo)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生具有多種生物活性的細(xì)胞因子(cytokines,CKS)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。宿主在孕期主要是Th2應(yīng)答占

2、優(yōu)勢的免疫環(huán)境,Mφ被誘導(dǎo)向M2型細(xì)胞偏移,主要功能是分泌抗炎性細(xì)胞因子,發(fā)揮免疫抑制功能。本研究探討了孕前與孕中期大鼠感染TgCtwh6(Chinese 1基因型)蟲株后,體內(nèi)M1/M2的偏移及其差異,以及不同階段感染弓形蟲誘導(dǎo)的不良妊娠結(jié)局。本文旨在為我國優(yōu)勢基因型相關(guān)的先天性弓形蟲病的防治提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：將SD雌鼠分為4組,每組10只:
　?、僭星案腥窘M(inf-1);
　?、谠兄懈腥窘M(inf-

3、2);
　　③無孕對照組(con-1);
　?、苡性袑φ战M(con-2)。
　　孕前感染組于合籠前一天,孕中感染組于孕第8天,分別腹腔注射1ml生理鹽水含2000個(gè)速殖子;對照組只注射等量生理鹽水。于妊娠第14天處死大鼠,取腹腔巨噬細(xì)胞、胎盤及胚胎。胎盤4％甲醛固定,石蠟包埋,HE染色。胚胎用熒光定量PCR做垂直傳播的檢測,并對獲得的胚胎數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。巨噬細(xì)胞上清檢測尿素和NO;ELISA試劑盒檢測上清細(xì)胞因子I

4、L-10,IL-12,TNF-α,和TGF-β水平;用Western blotting檢測巨噬細(xì)胞內(nèi)iNOS和Arg-1的表達(dá);提取巨噬細(xì)胞RNA,用熒光定量PCR檢測Arg-1、iNOS、IL-10,IL-12,TNF-α,和TGF-β的mRNA轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果：1、對感染后的大鼠持續(xù)靜脈采血21天,并未檢測到Toxo-DNA;大鼠在感染后沒有出現(xiàn)豎毛、弓背等機(jī)型期表現(xiàn),也未觀察到流產(chǎn)和死亡現(xiàn)象。
　　2、孕前感染組血

5、清NO水平最高;有孕對照組NO水平最低。Arg-1水平在孕前感染組最低;有孕對照組最高。M1型細(xì)胞因子iNOS等在孕前感染組表達(dá)水平高于其他組,其次是孕中感染組,有孕對照組最低。M2型細(xì)胞因子Arg-1等的表達(dá)水平在孕中感染組表達(dá)最高。
　　3、HE染色結(jié)果顯示,與孕中期感染相比,孕前感染組胎盤局部出現(xiàn)大量的、更嚴(yán)重的淋巴細(xì)胞浸潤。兩感染組的胚胎統(tǒng)計(jì)顯示,孕前感染組病理性胚胎發(fā)生率更高。
　　結(jié)論：孕前、孕中期用TgCtwh