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文檔簡介
1、目的:研究B7-H2基因3’-UTR內的單核苷酸多態(tài)性(SNP)與胃癌發(fā)生的相關性,并進一步探討胃癌組織中B7-H2表達下調的機制。
方法:1.運用生物信息學軟件篩選出位于B7-H2基因3’-UTR內的SNP位點及可能存在的miRNA結合位點;選擇位于預測的miRNA結合位點內的,且較小等位基因頻率(MAF)大于10%的SNP進行研究。2.收集183例胃癌患者及348例正常人的外周血樣本,采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度分析
2、法(PCR-RFLP)檢測所收集的樣本中該SNP的基因型分布,分析不同基因型與胃癌發(fā)生及臨床病理參數(shù)的關系。3.采用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)分析所預測的miRNA對B7-H2基因表達的調控作用,進一步探討調控機制。
結果:1.從SNP數(shù)據(jù)庫中查找到40個位于B7-H2基因3′-UTR的SNP位點;較小等位基因頻率(MAF)大于10%的SNP有rs15927,rs3804033,rs55769116,rs4819388和rs557
3、69116,其中rs4819388位于miR-24與B7-H2基因3’-UTR結合區(qū)內,因此選取該SNP進行研究。2.數(shù)據(jù)分析顯示SNP rs4819388與胃癌的發(fā)生密切相關。在胃癌患者中,GA雜合子所占比例明顯高于 GG純合子(55.7% vs32.8%,OR=1.60,95%CI=1.08–2.37);相對于GG純合子,基因型為AA的個體發(fā)生淋巴結轉移的可能性顯著增高(OR=9.27,95%CI=1.16–74.2,p=0.017
4、),腫瘤細胞低分化的可能性更大(OR=8.16,95%CI=0.98–67.8,p=0.043),TNM分期為III/IV期的可能性更大(OR=4.75,95%CI=1.01–22.4,p=0.046);A等位基因在發(fā)生淋巴結轉移(OR=1.76,95%CI=1.05-2.95,p=0.034)和/或TNM分期為III/IV期(OR=1.80,95%CI=1.07-3.04,p=0.032)的患者中的頻率明顯高于G等位基因。3.雙熒光素
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