雞馬立克氏病病毒中國分離毒株分子進化研究.pdf

1、雞馬立克氏病（MD）是由雞馬立克氏病病毒1型（MDV-1）引起的一種嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的傳染性淋巴組織增生性疾病。主要臨床癥狀表現為T淋巴細胞瘤和神經麻痹。其病原MDV-1又稱禽皰疹病毒2型，屬于皰疹病毒科，馬立克病毒屬。
　　該病在疫苗的廣泛使用下得到了有效的控制，但近些年來MD流行病學調查顯示，中國免疫雞群中MD發(fā)生比例呈明顯上升趨勢。分離毒株的毒力研究也證明，新分離毒株致病特征發(fā)生變化，病毒毒力明顯增強。在MDV毒力不斷增強，現

2、有MD疫苗不能提供完全保護的情況下，研究MDV分離毒株分子進化規(guī)律和趨勢，尋找分離毒株毒力相關因子，是目前防控MD的前提。之前對中國MDV分離毒株分子進化的研究主要集中于少數幾個基因，對于MDV這樣的大基因組病毒，難以反映其真實分子進化規(guī)律。而完成全基因組測序的中國分離毒株僅僅包括了814、LMS和GX01013株毒株。這些數據不能夠充分揭示中國MDV分離毒株的分子進化以及探究分離毒株毒力相關因子。
　　本研究中我們選取6株在20

3、11-2014年分離的中國MDV毒株LCC、LTS、WC/1203、JL/1404、CC/1409和HS/1412株以及1株1974年分離的中國毒株J-1株，進行病毒基因組高通量測序和序列比對分析?；蚪M組裝結果顯示7株測序毒株基因組大小相似，在176kbp左右，基因組結構符合E類皰疹病毒基因組特點。通過基因組進化樹分析，首次從基因組水平證明在過去的二十多年間中國和世界范圍內的MDV已經進化；20世紀90年代是MDV進化的轉折點?；蚪M

4、和重要基因、片段進化樹分析證明，2000年以后分離的中國毒株具有近的進化關系。經過基因組序列比對分析，證明中國分離MDV毒株包含特異性序列，尤其是在 meq、ICP4、UL36基因和短獨特區(qū)與末端短重復區(qū)（US/TRS）連接區(qū)域。其中，meq、 ICP4、UL29基因的點突變，US/TRS連接區(qū)域151-bp插入推測更可能與中國 MDV新分離毒株毒力增強有關。另外，單核苷酸突變RLORF4 T11M、RLORF7 P176R/T、UL2

5、9 R506L、RSORF1 K44 R和ICP4 K1948M是中國新分離毒株的特有突變。
　　為了更全面的了解中國MDV分離毒株毒力相關因子，我們對中國MDV分離毒株L-MS體外傳代致弱株L-MSp75和L-MSp110及其親本毒株L-MSp5進行基因組高通量測序和序列比對分析，探究MDV毒株體外進化分子變異規(guī)律。序列比對分析證明，中國MDV分離毒株體外傳代致弱株發(fā)生了大量的插入、缺失和非無義單核苷酸突變。特別是RLORF1、

6、RLORF2、RLORF12、ICP4、US7和 US8基因突變以及內部短重復區(qū)（IRS）上游（TRS下游）601-bp缺失，IRS/US（US/TRS）連接區(qū)域15bp插入、116bp缺失推測可能與中國MDV分離毒株毒力致弱有關。結合上述中國MDV分離毒株毒力增強相關分子變異結果，證明ICP4基因和US/TRS連接區(qū)域是中國MDV分離毒株毒力相關的變異富集區(qū)，是下一步MDV毒力相關分子研究的重點。
　　本研究首次從基因組水平對中