靶向于白細胞介素15受體的融合毒素研究.pdf

1、目的:一些惡性腫瘤如成人T淋巴細胞性白血病和骨髓瘤細胞表面含有豐富的白介素15受體(IL-15R),炎癥性自身免疫性疾病如類風濕性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、克隆氏病等也都發(fā)現(xiàn)活化的IL-15R陽性T淋巴細胞的浸潤和聚集.IL-15及IL-15R陽性細胞在這些疾病的病理過程中起著重要作用.本項目應用基因重組技術(shù),以人白介素15(hIL-15)或受體拮抗型人白介素15突變體(hIL-15M)為載體,綠膿桿菌外毒素突變體PE△293為彈頭,構(gòu)建、

2、表達兩種融合毒素,為研制可特異性消除IL-15R高表達細胞的導向藥物奠定基礎.方法:通過PCR對綠膿桿菌外毒素進行人工改造,獲得一種新的綠膿桿菌外毒素突變體,PE△293.將hIL-15成熟肽基因、hIL-15M基因片段分別與PE△293基因按正確的閱讀框架融合,定向克隆于pET16b表達載體,得到重組表達質(zhì)粒pET-hIL-15-PE△293和pET-hIL-15M-PE△293.將這兩種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)pl

3、ysS,經(jīng)IPTG誘導表達,變性條件下通過Ni<'2+>-NTA親和層析純化出兩種融合蛋白,即hIL-15-PE△293和hIL-15M-PE△293.復性后MTT法測定兩種融合蛋白對IL-15R陽性人紅白血病細胞K562和其阿霉素耐藥株K562/AO<,2>以及IL-15R陰性的急性T細胞白血病細胞株Jurkat的細胞毒作用.結(jié)果:經(jīng)酶切分析和DNA序列分析,所構(gòu)建的兩個重組質(zhì)粒均正確插入了各自的融合基因.SDS-PAGE分析表明,兩

4、種重組菌株誘導后分別表達與融合蛋白預計分子量相吻合的特異性蛋白帶.在變性條件下從大腸桿菌中純化出兩種融合蛋白,復性后兩種融合蛋白對IL-15R陽性細胞株K562和K562/AO<,2>具有明顯的殺傷活性,但是對IL-15R陰性細胞株Jurkat沒有表現(xiàn)明顯的殺傷作用.結(jié)論:(1)融合蛋白hIL-15-PE△293和hIL-15M-PE△293對K562和K562/AO<,2>具有良好的殺傷活性,而對IL-15R陰性細胞株Jurkat沒有