SSeCKS蛋白在新生大鼠高氧肺損傷中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：采用新生SD大鼠建立高氧肺損傷動(dòng)物模型，動(dòng)態(tài)觀察肺組織濕干重質(zhì)量比和病理改變，檢測(cè)高氧暴露各時(shí)相點(diǎn)新生大鼠肺組織中Src抑制的蛋白激酶C的底物(Src suppressed Ckinase substrate，SSeCKS)的表達(dá)，闡述SSeCKS蛋白與高氧肺損傷的關(guān)系：觀察高氧刺激肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中SSeCKS蛋白的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞骨架的影響，探討SSeCKS蛋白參與高氧肺損傷的病理機(jī)制。 方法：1,64只出生12 h內(nèi)的

2、SD清潔級(jí)大鼠，隨機(jī)分為2組：空氣對(duì)照組、高氧暴露組，每組8只。高氧暴露組置于常壓高氧艙中，保持氧濃度>95％，空氣對(duì)照組置于同一室內(nèi)，于12 h、24 h、48 h和72 h處死動(dòng)物后分別進(jìn)行肺組織濕干重質(zhì)量比(W/D)、肺組織病理HE染色、Western blot法及間接免疫酶標(biāo)法檢測(cè)肺組織中SSeCKS蛋白的表達(dá)，間接免疫熒光雙重標(biāo)記法明確SSeCKS蛋白在肺組織的細(xì)胞定位。 2.128只出生12 h內(nèi)的SD清潔級(jí)大鼠，隨

3、機(jī)分為4組：D:空氣對(duì)照組；n):高氧暴露組；III):高氧露+R031-8220(蛋白激酶C抑制劑)組；Ⅳ)：高氧暴露+生理鹽水組，每組8只。II、III、IV組置于常壓高氧艙中，保持氧濃度>95％，I組置于同一室內(nèi)，III組自高氧暴露第一天起腹腔注射R031-8220，連續(xù)3天，同時(shí)Ⅳ組腹腔注射生理鹽水。分別于高氧暴露12 h、24 h、48 h、72 h處死動(dòng)物，進(jìn)行肺組織濕干重質(zhì)量比(W/D)、病理HE染色檢查，于高氧暴露72

4、h觀察各組肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中SSeCKS蛋白的表達(dá)及其與細(xì)胞骨架的關(guān)系。 結(jié)果： 1.高氧暴露各時(shí)相點(diǎn)肺組織中SSeCKS蛋白的表達(dá)與肺損傷 12 h時(shí)相點(diǎn)：與空氣對(duì)照組相比，高氧暴露組W/D、肺組織病理HE染色及SSeCKS蛋白表達(dá)無(wú)差異；24 h時(shí)相點(diǎn)：高氧暴露組W/D無(wú)改變，病理HE染色肺泡內(nèi)出現(xiàn)少量紅細(xì)胞，肺泡壁增厚，開(kāi)始出現(xiàn)急性肺損傷表現(xiàn)，SSeCKS蛋白表達(dá)開(kāi)始增加；48 h時(shí)相點(diǎn)：高氧暴露組W/D

5、增加，病理HE染色肺泡內(nèi)紅細(xì)胞增多，肺間隔增寬，粒細(xì)胞附壁，出現(xiàn)急性炎癥反應(yīng)和肺水腫，SSeCKS蛋白表達(dá)進(jìn)一步增加；72 h時(shí)相點(diǎn)：高氧暴露組W/D進(jìn)一步增加，病理HE染色，肺泡內(nèi)可見(jiàn)大量的紅細(xì)胞，肺泡間隔粒細(xì)胞浸潤(rùn)，炎癥、水腫進(jìn)一步加重，出現(xiàn)肺出血， SSeCKS蛋白表達(dá)達(dá)到最高，且主要定位在肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。 2.高氧暴露時(shí)肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中SSeCKS蛋白的表達(dá)與肺損傷 2.1各組各時(shí)相點(diǎn)肺組織(W/D)及病

6、理改變：12 h時(shí)相點(diǎn)：各組W/D、病理HE染色，均無(wú)改變；24 h時(shí)相點(diǎn)：各組W/D無(wú)差異，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組病理HE染色肺泡內(nèi)出現(xiàn)少量紅細(xì)胞，I組無(wú)改變；48 h時(shí)相點(diǎn)：Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組W/D增加，病理HE染色肺泡內(nèi)紅細(xì)胞增多，肺間隔增寬，粒細(xì)胞附壁；72 h時(shí)相點(diǎn)，Ⅱ、Ⅳ組W/D與Ⅰ組比較增加，出現(xiàn)明顯急性炎癥包括炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、出血、水腫，高氧刺激引起肺組織急性炎癥、水腫及肺出血；Ⅲ組W/D降低，病理改變較Ⅱ組、Ⅳ明顯減輕， PKC抑制劑R

7、031-8220可以明顯減輕高氧肺損傷病理改變。 2.272 h時(shí)相點(diǎn)各組SSeCKS蛋白的表達(dá)及亞細(xì)胞位置的變化：Ⅰ組，SSeCKS蛋白主要分布在細(xì)胞膜；Ⅱ、Ⅳ組，SSeCKS蛋白表達(dá)與Ⅰ組比較增加，主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中，高氧暴露可以引起毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中SSeCKS表達(dá)增加及亞細(xì)胞位置的改變；Ⅲ組，SSeCKS蛋白表達(dá)與Ⅱ、Ⅳ組比較明顯減少，SSeCKS蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞膜，PKC抑制劑R031-8220可以抑制毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)

8、胞中SSeCKS的表達(dá)及亞細(xì)胞位置的改變。 2.372時(shí)相點(diǎn)各組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中細(xì)胞骨架的的變化：Ⅰ組：內(nèi)皮細(xì)胞中細(xì)胞骨架在細(xì)胞質(zhì)中均勻分布，Ⅱ、Ⅳ組：細(xì)胞骨架應(yīng)力纖維形成，細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞間間隙增加；Ⅲ組中PKC抑制劑可以部分抑制細(xì)胞骨架重構(gòu)。 結(jié)論： 1)新生大鼠持續(xù)高氧暴露24 h開(kāi)始出現(xiàn)急性肺損傷的病理改變，72 h可以引起明顯的炎癥、水腫及肺出血； 2)高氧暴露刺激新生大鼠肺組織中SSeCK