短暫反復缺血預處理對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的:腎缺血再灌注損傷(renal ischemia/reperfusion injury,RI/RI)是臨床上常見的病理生理現(xiàn)象,在缺血性急性腎損傷的病理過程中起重要作用,是多因素參與的復雜病理過程。缺血預處理(ischemicpreconditioning,IPC)指組織器官遭受反復短暫缺血后,可在后續(xù)的長期缺血中得到保護,使缺血損傷減輕。研究發(fā)現(xiàn),IPC對心、肝和小腸等許多器官均具有保護作用,但其作用機制尚未完全闡明。短暫反復IP

2、C是否對RI/RI具有保護作用,目前少有報道。因此,探討短暫反復IPC對RI/RI的保護作用及其機制,對RI/RI的防治具有十分重要的意義。本實驗旨在應用生理,生化,放射免疫及免疫組化等方法觀察短暫反復IPC對RI/RI的作用,并探討其可能的作用機制。
　　 方法:成年健康雄性SD大鼠40只,體重150-180g,在18-22°度實驗室安靜飼養(yǎng)兩日后動物隨機分為5組,即:
　　 1、假手術(shù)組(Sham)
　　 2

3、、缺血再灌注組(I/R)
　　 3、五分鐘缺血預處理一次+缺血再灌注(1+I/R)
　　 4、五分鐘缺血預處理二次+缺血再灌注(2+I/R)
　　 5、五分鐘缺血預處理三次+缺血再灌注(3+I/R)
　　 各組動物經(jīng)1％戊巴妥鈉腹腔麻醉,開腹,暴露雙側(cè)腎動、靜脈。假手術(shù)組,只開腹不夾閉雙側(cè)腎動、靜脈;I/R組,夾閉雙側(cè)腎動、靜脈45min松夾再灌;1+I/R、2+I/R和3+I/R各組則分別夾閉雙側(cè)腎動、

4、靜脈五分鐘再灌五分鐘一次,兩次和三次(IPC)后再行夾閉雙側(cè)腎動、靜脈45 min,松夾再灌后,逐層縫合腹膜,腹壁肌肉和皮膚。24小時后取血及雙側(cè)腎臟測定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、腎組織丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、內(nèi)皮素(ET)以及腎組織HO-1的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠RI/RI后,光鏡所見:Sham組腎組織無明顯異常;I/R組腎組織損

5、傷加重,表現(xiàn)為腎小管上皮細胞渾濁腫脹、壞死、管腔擴張,間質(zhì)變寬、水腫、有大量炎細胞浸潤。1+I/R組、2+I/R和3+I/R各組腎小管損傷程度均較I/R組明顯減輕,間質(zhì)炎細胞明顯減少,水腫明顯減輕。其中以3+I/R組損傷程度減輕的最為顯著。
　　 2、大鼠RI/RI后,I/R組腎功能明顯下降,BUN和Scr均明顯高于Sham(P＜0.01);與I/R組相比,1+I/R、2+I/R和3+I/R各組BUN和Scr均明顯降低(P＜0.

6、05～0.01),其中以3+I/R組降低程度最為顯著。
　　 3、大鼠RI/RI后,I/R組MDA含量較Sham組顯著升高;SOD活力則較Sham組明顯降低(P＜0.01);與I/R組相比,1+I/R、2+I/R和3+I/R各組SOD活力均明顯增加,而MDA含量則明顯降低(P＜0.05～0.01),其中以3+I/R組MDA含量降低的最為顯著。
　　 4、大鼠RI/RI后,FR組NO和iNOS含量均明顯高于Sham組(P＜

7、0.01);與I/R組相比,I+I/R、2+I/R和3+I/R各組NO含量均明顯增加(P＜0.05～0.01),而iNOS含量則明顯降低(P＜0.05～0.01)。
　　 5、大鼠RI/RI后,I/R組ET含量明顯高于Sham組(P＜0.01);與I/R組相比,1+I/R、2+I/R和3+I/R各組ET含量則顯著減低(P＜0.05～0.01),其中以3+I/R組降低的最為顯著。
　　 6、大鼠RI/RI后,腎組織HO-1

8、免疫組化顯示:Sham組腎小管上皮細胞內(nèi)HO-1表達不明顯,I/R組腎小管上皮細胞內(nèi)HO-1表達較Sham組明顯增加,與I/R組相比,1+I/R、2+I/R和3+I/R各組腎小管上皮細胞內(nèi)HO-1表達均明顯增加,其中以3+I/R組HO-1表達增加的最為明顯。
　　 結(jié)論:
　　 1、RI/RI后,腎功能和腎小管上皮細胞明顯受損。RI/RI大鼠BUN、Scr、MDA、iNOS含量均較Sham組明顯增加,SOD活力則較Sha

9、m組明顯降低,腎組織ET含量明顯增加,腎小管上皮細胞內(nèi)HO-1免疫反應陽性顆粒表達增加。
　　 2、短暫反復IPC可顯著減輕RI/RI大鼠腎組織損傷,降低BUN、Scr和MDA含量,增加腎組織SOD活力。表明短暫反復IPC可以減輕RI/RI大鼠腎組織損傷,改善腎功能。
　　 3、短暫反復IPC能明顯降低腎組織iNOS含量,增加NO含量,降低腎組織ET含量,增加腎小管上皮細胞內(nèi)HO-1免疫反應陽性顆粒的表達。表明短暫反復I