電針對(duì)腦缺血大鼠細(xì)胞間粘附分子-1介導(dǎo)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的腦血管病已成為當(dāng)今危害人類，特別是中老年人健康的重癥疾病之一。在世界與我國(guó)人口老齡化趨勢(shì)日益加速的情況下，腦卒中的危害性亦必然日益突出，因此，腦卒中的防治已是目前公共衛(wèi)生領(lǐng)域最受關(guān)注的健康問(wèn)題之一。缺血性卒中的發(fā)病率遠(yuǎn)高于出血性卒中。隨著對(duì)缺血性腦卒中研究的深入，發(fā)現(xiàn)腦缺血后相當(dāng)部分的血管能自然再通或溶栓治療后血流恢復(fù)再通，但隨之出現(xiàn)再灌注損傷。炎癥反應(yīng)是造成缺血再灌注后腦損傷的主要原因。炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵步驟是白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附

2、、外滲，當(dāng)內(nèi)皮功能異常時(shí)，黏附分子表達(dá)過(guò)度增加，并從內(nèi)皮表面脫落，以可溶形式存在于血清中并能夠被測(cè)定，ICAM-1在腦缺血再灌注損傷中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型，觀察電針對(duì)ICAM-1介導(dǎo)的腦內(nèi)微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響，探討早期針刺治療抗腦缺血再灌注損傷的機(jī)制。 方法采用SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組，假手術(shù)組，模型組(缺血0.5h再灌注24h)，電針組(缺血0.5h再灌注24h模型加電針)。采用大腦

3、中動(dòng)脈線栓法制備MCAO缺血再灌注模型，神經(jīng)功能障礙評(píng)分參照Z(yǔ)ea-Longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。電針組取百會(huì)、水溝穴，采用疏密波，頻率4Hz/16Hz，每次持續(xù)刺激30分鐘。隨相應(yīng)時(shí)相，部分大鼠以10％水合氯醛足量麻醉，采用4℃4％多聚甲醛200ml(含0.1％DEPC)心臟灌注固定，迅速取腦，在視交叉平面前后2mm處將腦冠狀切開(kāi)，留取中間部分置于4℃4％多聚甲醛固定液中過(guò)夜，將固定后的腦組織進(jìn)行常規(guī)上行脫水、二甲苯透明后石蠟包埋。分別應(yīng)用HE

4、、TUNEL染色、免疫組化SABC方法觀察腦缺血再灌注后缺血側(cè)腦組織的病理學(xué)改變、缺血側(cè)皮質(zhì)和基底節(jié)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡數(shù)、ICAM-1蛋白、Bcl-2蛋白、c-fos蛋白的表達(dá)及電針對(duì)其的影響。用計(jì)算機(jī)圖像分析儀(HPIAS-1000，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院千屏影像公司產(chǎn))對(duì)各組TUNEL染色陽(yáng)性、ICAM-1、Bcl-2、c-fos陽(yáng)性的微血管計(jì)數(shù)分析。隨相應(yīng)時(shí)相，部分大鼠摘除眼球后取血2ml置于室溫下待血液凝固后，4℃3000rp

5、m離心10min，分離血清，以ELISA法檢測(cè)血清中sICAM-1的含量；部分大鼠采血后斷頭處死在冰塊上迅速取缺血側(cè)腦組織，勻漿，用磷基轉(zhuǎn)移片法檢測(cè)缺血腦組織中PKC的活性。所有數(shù)據(jù)均輸入計(jì)算機(jī)，以SPSS11.0軟件統(tǒng)計(jì)包處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。 結(jié)果(1)電針可明顯改善腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)缺損(p＜0.05)；可明顯減少腦缺血再灌注大鼠缺血側(cè)皮質(zhì)和基底節(jié)區(qū)微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率(p＜0.05)；可有效改善腦缺血再

6、灌注大鼠缺血側(cè)腦組織的病理學(xué)改變。 (2)腦缺血再灌注后缺血腦區(qū)微血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1的表達(dá)和外周血中sICAM-1的含量增加(p＜0.01)，電針治療后，缺血腦區(qū)微血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1的表達(dá)和外周血中sICAM-1的含量減少(p＜0.05)。 (3)腦缺血再灌注后缺血腦組織PKC活性增強(qiáng)(p＜0.01)，電針治療后，缺血腦組織PKC活性減弱(p＜0.05)。 (4)腦缺血再灌注后缺血側(cè)皮質(zhì)和基底節(jié)區(qū)微血

7、管內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2和c-fos蛋白表達(dá)均增加(p＜0.01)，電針治療后，缺血側(cè)皮質(zhì)和基底節(jié)區(qū)微血管內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)增加、c-fos蛋白表達(dá)減少(p＜0.05)。 結(jié)論ICAM-1、PKC、Bcl-2、c-fos參與了腦缺血再灌注損傷腦血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的發(fā)生過(guò)程。電針對(duì)腦缺血再灌注損傷細(xì)胞間黏附分子-1介導(dǎo)的腦血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)具有良性調(diào)節(jié)作用，這一作用可能通過(guò)以下途徑實(shí)現(xiàn)的：PKC活性降低；同時(shí)降低其上游I