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文檔簡介
1、目的:通過臨床研究和動物實驗觀察健胃愈瘍顆粒(簡稱JWYY)抗消化性潰瘍(Peptic Ulcer,PU)復發(fā)的作用,并觀察其對PU愈合和復發(fā)過程中胃黏膜炎癥及核因子κB(Nuclear Factor-kappa B,NF-κB)、β-防御素-2表達的影響,以期從炎癥角度揭示JWYY抗PU復發(fā)作用的機制。 方法: 1.臨床研究:經(jīng)胃鏡和組織學及尿素酶檢查證實幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)陽性的
2、PU且中醫(yī)辨證屬肝郁脾虛型的患者50例,隨機分為健胃愈瘍顆粒試驗組(簡稱JWYY組)和西藥對照組各25例;另取Hp陰性PU患者17例設為Hp陰性PU對照組;胃鏡及組織學均大致正常且Hp陰性者8例設為健康對照組。JWYY組服健胃愈瘍顆粒劑3g/∥次,3次/d,連服6w。西藥對照組服滅滴靈0.4g bid,阿莫西林1.Og bid,連服7d;奧美拉唑腸溶片20mgbid,連服6w。兩組停藥后4w復查胃鏡,進行胃鏡療效、Hp根除率、證候療效及
3、生活質(zhì)量評定,兩次胃鏡檢查時均取胃竇黏膜行蘇木素.伊紅(HE)染色、免疫組化、免疫印跡(Western blot)、原位雜交檢查,觀察胃竇炎癥程度、檢測NF-κBp65、β-防御素-2蛋白及mRNA表達。對潰瘍愈合的患者進行隨訪,統(tǒng)計PU一年復發(fā)率。Hp陰性PU對照組及健康對照組不作治療和復查,只取一次標本行上述檢查。 2.動物實驗:將116只大鼠隨機分為5組,即正常對照組(18只)、假手術對照組(18只)、模型組(32只)、J
4、WYY組(24只),奧美拉唑?qū)φ战M(24只)。采用改良Okabe乙酸涂抹法復制實驗性胃潰瘍模型,正常對照組不造模,假手術對照組以生理鹽水代替乙酸,造模后24h,JwYY組、奧美拉唑?qū)φ战M分別灌胃JWYY和奧美拉唑藥液,量分別為0.08lg、0.36mg/lml/100g體重,其余各組灌服蒸餾水,量均為lml/100g體重,每天1次。造模第90d,再將模型組大鼠隨機分為模型組和模型復發(fā)組,腹腔注射白細胞介素-1β(interleukin-
5、lβ, IL-lβ)(lμg/kg體重)復制胃潰瘍復發(fā)模型,模型組以生理鹽水代替IL-lβ。分別于造模第8d、16d、92d(即復發(fā)潰瘍誘導后48h)均分3批處死各組大鼠,剖腹取胃,在觀察胃大體情況、對胃潰瘍指數(shù)(Gastric ulcer index,GUI)進行檢測后,剪取胃竇部含潰瘍的(無潰瘍者在相應部位取材)胃組織行HE染色觀察組織學改變,免疫組化、免疫印跡、原位雜交檢測NF-kBp65、β-防御素-2蛋白及mRNA表達。
6、 結果: 1.臨床研究:①.JWYY組完成6w治療和復查者24例,胃鏡觀察臨床痊愈12例,顯效7例,有效4例,無效1例;Hp根除11例,根除率為45.8%;中醫(yī)證候觀察臨床痊愈lO例,顯效8例,有效4例,無效2例;PU疾病量表分值較治療前顯著提高。與西藥對照組比較,胃鏡療效無顯著差別(P>0.05),Hp根除率較低(P<0.05),而中醫(yī)證候和生活質(zhì)量改善優(yōu)于西藥對照組(均P<0.05);②JWYY組完成1年隨訪者16例,復發(fā)
7、1例,復發(fā)率6.25%;西藥對照組完成1年隨訪者15例,復發(fā)l例,復發(fā)率為6.67%。兩組一年復發(fā)率比較無顯著差別(P>0.05)。③.Hp陽性PU患者胃竇慢性炎癥和活動性程度較Hp陰性PU對照組顯著增強,JWYY能顯著減輕Hp陽性PU患者胃竇慢性炎癥和活動性程度(分別P<0.01、P<0.05),與西藥對照組比較無顯著差別(均P>0.05)。④.NF-KBp65mRNA和蛋白表達有失活和活化兩種狀態(tài),Hp陽性PU患者胃黏膜NF-KBp
8、65tuRNA和蛋白激活,表達水平較Hp陰性PU對照組和健康對照組顯著上調(diào)(均P<0.01),經(jīng)JWYY和西藥治療后均較治療前顯著下調(diào)(均P<0.01),JWYY組和西藥對照組之間比較無顯著差別(均P>0.05);NF-KBp65mRNA和蛋白表達與胃竇慢性炎癥和活動性程度均呈正相關(均P<0.01)。⑤.β-防御素-2mRNA和蛋白在健康對照組胃黏膜無明顯表達,在Hp陰性PU對照組少量表達,而Hp陽性PU患者表達顯著上調(diào)(均P<0.0
9、1或0.05),主要位于胃黏膜表層上皮細胞胞漿。經(jīng)JWYY和西藥治療后均較治療前顯著下調(diào)(P<0.01或0。05),JWYY組和西藥對照組之間比較無顯著差別(均P>0。05);β-防御素-2mRNA和蛋白表達與胃竇慢性炎癥和活動性程度均呈正相關(均P<0.01)。⑥.NF-κBp65mRNA和蛋白表達與β-防御素-2rnRNA和蛋白表達均呈正相關(均P<0.01)。 2.動物實驗:①.胃潰瘍造模第8d,經(jīng)乙酸造模的各組大鼠胃黏膜
10、肉眼觀察和組織學檢查均可見到潰瘍病灶,但潰瘍程度不一,模型組GUI最高,JWYY組、奧美拉唑?qū)φ战MGUI均顯著低于模型組(P<0.01或0.05)。16d,除模型組3只見淺小潰瘍外,其余各組大鼠潰瘍均已愈合,JWYY組和奧美拉唑?qū)φ战M愈合潰瘍組織形態(tài)學表現(xiàn)優(yōu)于模型組。92d,模型復發(fā)組、JWYY組、奧美拉唑?qū)φ战M復發(fā)率分別為87.5%、12.5%、25%,后二者與前者比較有顯著性差異(均P<0.01)。JWYY組和奧美拉唑?qū)φ战M所見再生
11、黏膜較厚,修復較完全,排列較整齊。②8d、16d模型組、92d模型復發(fā)組潰瘍邊緣或再生黏膜慢性炎癥細胞和中性粒細胞密度均顯著高于正常和假手術對照組(均P<0.01),JWYY組、奧美拉唑?qū)φ战M均較同期模型組或模型復發(fā)組顯著減低(P<0.01或0.05)。慢性炎癥細胞和中性粒細胞密度與GUI、潰瘍復發(fā)呈正相關,與愈合呈負相關。③正常和假手術對照組NF-κzBp65mRNA和蛋白呈失活狀態(tài);8d、16d模型組、92d模型復發(fā)組潰瘍邊緣或再生
12、黏膜NF-κzBp65mRNA和蛋白激活,表達較正常和假手術對照組顯著上調(diào)(均P<0.01),JWYY組和奧美拉唑?qū)φ战M表達均較同期模型組或模型復發(fā)組顯著減低(P<0.01或0.05)。NF-κzBp65mRNA和蛋白表達與慢性炎癥細胞密度、中性粒細胞密度均呈正相關(均P<0.01)。④β-防御素-2mRNA和蛋白在正常和假手術對照組大鼠胃黏膜表層上皮細胞有表達,8d模型組、JWYY組和奧美拉唑?qū)φ战M潰瘍邊緣均無明顯表達。16d模型組、
13、92d模型復發(fā)組表達顯著高于正常和假手術對照組(P<0.01或0.05),JWYY組和奧美拉唑?qū)φ战M表達均較同期模型組或模型復發(fā)組顯著下調(diào)(P<0.01或0.05);β-防御素-2mRNA和蛋白表達與慢性炎癥細胞密度、中性粒細胞密度均呈正相關(均P<0.01),與NF-κBp65mRNA和蛋P白表達呈正相關(均p<0.01)。 結論: 1.JWYY能顯著改善肝郁脾虛型Hp陽性PU患者生活質(zhì)量。JWYY能有效的促進PU愈合
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