RNA結合蛋白QKI-5在乳腺癌中的初步功能研究.pdf

1、雌激素與雌激素受體結合，形成雌激素-雌激素受體復合物，啟動含有雌激素應答元件的基因的轉錄，在組織再生和骨代謝中具有重要的生理意義。然而雌激素信號通路的異常亦可導致乳腺細胞表型及生物學特性的改變，從而誘發(fā)乳腺癌的生成。ERβ是1996年kuiper等從大鼠前列腺和卵巢cDNA文庫中克隆得到的一種新的雌激素受體。隨著ERβ的發(fā)現(xiàn)，人們積極開展了ERβ與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展和預后以及其在指導乳腺癌的內分泌治療中的價值研究，但截至目前ERβ在乳腺癌

2、中的作用尚不明確。盡管如此，大量的研究還是提示ERβ對乳腺癌來說是一個預后良好的指標。
　　QKI是屬于STAR（signaltransductionandactivationofRNA）家族的一種RNA結合蛋白，在進化過程中高度保守，在神經系統(tǒng)發(fā)育過程中參與髓鞘發(fā)育。qki基因不同突變體小鼠可以表現(xiàn)在出生前死于心血管肌肉系統(tǒng)發(fā)育障礙，或于出生后10天表現(xiàn)為快速的震顫以及到了成年強直性驚厥的發(fā)作。
　　除了在神經系統(tǒng)中對于髓

3、鞘的形成發(fā)揮重要功能以外，QKI蛋白在血管發(fā)生、細胞凋亡、細胞黏附、細胞生長及形態(tài)形成和器官發(fā)生等方面具有舉足輕重的功能。根據RNA結合蛋白QKI與RNA序列的結合序列的特異性，對整個RNA進行篩選發(fā)現(xiàn)，QKI可能調控多達1430個下游靶基因，而其中有24％的基因參與細胞的增殖，轉移，高度提示QKI可能在腫瘤的增殖，轉移中發(fā)揮作用。此外，我們對qki基因上游啟動子區(qū)進行分析，發(fā)現(xiàn)該基因具有保守的ERE的結合位點，提示qki也可能受到雌激

4、素的調節(jié)。本研究通過RT-PCR、WesternBlot、啟動子熒光報告系統(tǒng)等實驗驗證了雌激素對QKI的表達調控，通過分析生物信息學預測的兩個潛在的QKI靶基因cdc42和par1在乳腺腫瘤中的表達以及改變QKI表達對該基因的影響，探討QKI對該基因的表達調控及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。本研究的初步結論如下：
　　1.利用Adeasy系統(tǒng)成功構建了可表達QKI-5的腺病毒表達載體。通過該載體可以實現(xiàn)在轉染效率低的細胞中過表達QKI

5、-5的目的。
　　2．分別觀察了幾種ER受體表達不同的乳腺癌細胞系中，QKI都有表達，表達水平高低與受體ER亞型之間無明確相關性；在腫瘤侵襲性高的、ERβ陽性的細胞中QKI表達水平最高；
　　3.細胞經過無酚紅和吸附炭預處理后的血清培養(yǎng)兩天后，再加入雌激素作用不同時間，通過RT-PCR，western-blot檢測，qki基因的轉錄水平和蛋白表達水平呈升高的趨勢。相反在ERβ的拮抗劑tamoxifen作用之后，RT-PCR檢

6、測其qki基因的轉錄水平下降。初步證明QKI可能受ER的轉錄調控。通過熒光素酶報告系統(tǒng)實驗表明qki基因啟動子的活性在雌激素處理之后有所上調，在tamoxifen作用后下調。表達調控可能參與乳腺腫瘤中QKI的表達異常，而加劇腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
　　4.通過人為升高和降低QKI的表達，我們發(fā)現(xiàn)cdc42,par1與QKI的表達呈現(xiàn)負相關，腺病毒載體感染乳腺癌細胞后，觀察到乳腺癌細胞發(fā)生形態(tài)和功能的改變。劃痕實驗顯示過表達QKI的細胞移