人胃癌MTHFR、表觀遺傳修飾與mTOR通路關系研究.pdf

1、上海交通大學博士學位論文人胃癌MTHFR、表觀遺傳修飾與mT通路關系研究姓名：孫丹鳳申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學（消化內(nèi)科）指導教師：房靜遠陳縈晅20080401上海交通大學醫(yī)學院博士論文中文摘要織中該通路蛋白的表達情況，為發(fā)現(xiàn)胃癌分子治療新靶點提供實驗和理論依據(jù)。方法：構建反義MTHFR質(zhì)?；騭iRNA表達質(zhì)粒以降低相應蛋白的表達，同時構建和轉染野生型MTHFR質(zhì)粒分析其高表達對胃癌細胞生存活力的影響。以Westernblottin

2、g鑒定該蛋白的表達，四唑藍(MTT)及細胞計數(shù)測定細胞活力，流式細胞術(FCM)分析細胞周期變化。實時定量PCR檢測癌基因cmyc和抑癌基因p21wAFl及M紀劇轉錄水平。甲基化特異性PCR(MSP)分析腫瘤相關基因啟動子甲基化情況。單獨或不同組合聯(lián)合應用mTOR抑制劑雷帕霉素(RAPA)、LY294002(P13K抑制劑)、trichostatinA(TSA，組蛋白去乙?；敢种苿?以及5脫氧雜氮胞(5azadC，DNA甲基化酶1抑制

3、劑)干預胃癌MKN45及SGC7901細胞。應用小于擾RNA(siRNA)技術敲除腫瘤細胞中的mTOR蛋白。Westemblotting檢測mTOR信號通路蛋白的表達，四唑藍(MTT)及細胞計數(shù)測定細胞活力，流式細胞術(FCM)分析細胞周期變化。實時定量PCR檢測抑癌基因p21wAFl、Syk(spleentyrosinekinase)、PTEN及p27砌p1轉錄水平。染色質(zhì)免疫沉淀技術檢測p21wAFl基因啟動子組蛋白乙?；剑瑏喠?/p>