自體軟骨細胞—藻酸鈣復合物修復羊膝關(guān)節(jié)負重區(qū)全層軟骨缺損的實驗研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩104頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、雖然骨科基礎(chǔ)、臨床研究有了很大的進步和發(fā)展,但是關(guān)節(jié)軟骨損傷的治療仍然是一個難以解決的問題。眾所周知,部分軟骨損傷不能自行修復,而全層骨軟骨損傷能夠由纖維軟骨修復,但是這種修復組織缺乏正常軟骨組織所具有的生物學、生物化學、和生物力學特性,因此在關(guān)節(jié)活動過程中,壓力的刺激下,很容易退變。為此,各種各樣的手術(shù)(如轉(zhuǎn)孔術(shù)、關(guān)節(jié)成形術(shù)、微骨折等),被應(yīng)用于臨床,試圖刺激骨髓干細胞,產(chǎn)生具有接近透明軟骨特性的軟骨來修復軟骨缺損,但事實證明,這些修

2、復組織在壓力刺激下很快發(fā)生退變。本研究試圖以接近人類膝關(guān)節(jié)解剖結(jié)構(gòu)的中國山羊為動物模型,研究它的軟骨細胞在體外分離、培養(yǎng)、快速擴增的方法;在藻酸鈣培養(yǎng)中的特性;觀察自體軟骨細胞復合藻酸鈣修復山羊膝關(guān)節(jié)負重區(qū)軟骨缺損的結(jié)果,以及修復過程中CPM(continuouspassivemotion,持續(xù)被動活動儀)對修復結(jié)果的影響。 方法:(1)取肩關(guān)節(jié)軟骨組織,體外分離、培養(yǎng)軟骨細胞、對培養(yǎng)的軟骨細胞進行蕃紅“O”、甲苯胺藍及Ⅱ型膠原

3、免疫組化染色等表型鑒定。(2)將鑒定證實為具有正常表型的軟骨細胞和cyteodex-3放入RCCS(rotarycellculturesystem,旋轉(zhuǎn)細胞培養(yǎng)系統(tǒng))培養(yǎng),和單層培養(yǎng)做對比,觀察微載體表面細胞的生長情況,用DNA的變化定量,觀察兩種培養(yǎng)方式細胞擴增的情況,并對RCCS培養(yǎng)的軟骨細胞進行表型鑒定。(3)將鑒定證實為具有正常表型的軟骨細胞和藻酸鈣凝膠復合,觀察藻酸鈣凝膠內(nèi)細胞的生長情況,用熒光分光光度計和紫外分光光度計觀察D

4、NA及GAG的量的變化,同時對藻酸鈣凝膠培養(yǎng)的軟骨細胞進行表型鑒定。(4)收集經(jīng)藻酸鈣培養(yǎng)的軟骨細胞和基質(zhì),體外培養(yǎng)組織工程化軟骨并對其進行組織學和免疫組化鑒定。(5)于山羊股骨髁負重面行直徑6mm全層軟骨缺損,分別以空白(缺損內(nèi)未植入任何組織);骨膜覆蓋;藻酸鈣凝膠填充缺損十骨膜覆蓋;復合自體軟骨細胞的藻酸鈣填充缺損+骨膜覆蓋;復合自體軟骨細胞的藻酸鈣填充缺損十骨膜覆蓋+CPM治療兩周,五種方式治療,分別于3月,6月取材(復合自體軟骨

5、細胞的藻酸鈣填充缺損+骨膜覆蓋+CPM有12月組),進行大體觀察,組織學檢查和病理評分。 結(jié)果:(1)由肩關(guān)節(jié)軟骨組織培養(yǎng)的軟骨細胞、RCCS擴增的軟骨細胞、短期培養(yǎng)的復合軟骨細胞的藻酸鈣凝膠,經(jīng)蕃紅“O”、甲苯胺藍及Ⅱ型膠原免疫組化染色均為陽性,證實具有正常軟骨細胞的表型;軟骨細胞快速貼附于微載體,RCCS能夠快速擴增軟骨細胞,12d內(nèi)能夠擴增15~17倍;(2)藻酸鈣為支架培養(yǎng)的軟骨細胞能夠保持球形狀態(tài),隨時間的延長,DNA

6、及GAG的含量逐漸增多;體外培養(yǎng)的組織工程化軟骨,經(jīng)蕃紅“O”、甲苯胺藍及Ⅱ型膠原免疫組化染色均為陽性。(3)藻酸鈣復合軟骨細胞修復羊負重區(qū)關(guān)節(jié)面軟骨缺損,從大體觀察、組織學、生化動物實驗結(jié)果進行比較,單因素統(tǒng)計學分析,發(fā)現(xiàn)各組均有不同程度的組織修復,復合自體軟骨細胞的藻酸鈣填充缺損+骨膜覆蓋+CPM組效果最好,而且與其它組的區(qū)別有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論: 1)體外成功地培養(yǎng)了保持表型穩(wěn)定的羊關(guān)節(jié)軟骨細胞,而且證實了RCCS

7、比普通單層培養(yǎng)更能夠快速擴增軟骨細胞。 2)藻酸鈣凝膠短期培養(yǎng)軟骨細胞,能夠保持軟骨細胞的表型,分泌GAG和Ⅱ型膠原;軟骨細胞在藻酸鈣凝膠中培養(yǎng)能夠增殖。 3)利用藻酸鈣介導培養(yǎng)的軟骨細胞和分泌的基質(zhì),成功的構(gòu)建了組織工程化軟骨,經(jīng)組織學和免疫組化鑒定,具有正常軟骨組織的組織學和生化特性。 4)藻酸鈣復合自體軟骨細胞支架填充缺損+骨膜覆蓋+CPM活動,能夠較好地修復山羊膝關(guān)節(jié)負重區(qū)軟骨缺損,經(jīng)一年觀察,未見退變現(xiàn)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論