鹽生海蘆筍及其內生真菌Salicorn46次級代謝產物研究.pdf

1、植物內生真菌種類繁多、分布廣泛，且能產生結構和活性多樣性的次級代謝產物，因此已成為發(fā)現(xiàn)新穎結構化合物的巨大資源寶庫。在內生真菌次級代謝產物的研究過程中，傳統(tǒng)的篩選方法是基于活性篩選和化學篩選或者二者的組合，這些方法最大的缺點就是常常導致已知微生物和已知化合物不斷重復的發(fā)現(xiàn)。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，基于聚酮合酶(polyketide synthases，PKS)功能基因的定向篩選方法已經成為發(fā)現(xiàn)新型化合物的重要策略之一。
　　

2、鹽生海蘆筍(Salicornia bigelovii Torr.)生長在高鹽環(huán)境中，能夠產生結構新穎與活性多樣的化合物，而且研究證實鹽生海蘆筍中蘊藏著多種內生真菌，這些內生真菌往往能夠產生多種活性次級代謝產物。
　　本研究利用有機溶劑對鹽生海蘆筍進行萃取，得到乙酸乙酯提取物;采用硅膠柱層析，Sephadex LH-20凝膠柱層析等分離手段對其分離純化，得到4個單體化合物;通過現(xiàn)代波譜學方法及相關文獻數據比對確定了這些單體化合物的結

3、構分別為:oleicaicd(1)、(3β,5a,8a,22E)-5,8-epidioxyergosta-6,9,22-trien-3-ol(2)、pentadecyl ferulate(3)和scopoletin(4)。
　　采用PDA平板法和斜面法從鹽生海蘆筍中分離純化出兩株編號分別為Salicorn54和Salicom46的內生真菌，并利用PCR技術進行真菌Ⅰ型PKS功能基因篩選，在菌株Salicorn46中分離得到1條PK

4、S KS基因片段，BLAST比對結果表明該基因序列與GenBank里已知的生物合成相關的PKS基因有較高相似性(90-95％)。通過系統(tǒng)發(fā)育分析表明，該PKS KS序列獨成一枝，提示該菌株可能具有產生新的聚酮化合物的潛力。
　　利用形態(tài)學與分子生物學相結合的方法將Salicorn54和Salicorn46分別鑒定為甜菜蛇眼莖點菌Phoma betae和柑桔青霉菌Penicillium citrinum。
　　對菌株Salic

5、orn46進行大量發(fā)酵、溶劑萃取、柱層析分離純化得到8個單體化合物，利用核磁共振、紅外、紫外、質譜、氣質聯(lián)用等波譜學手段鑒定其化學結構分別為:penieitriketo(5)、ergone(6)、(3β,5a,8a,22E)-5,8-epidioxyergosta-6,9,22-trien-3-ol(7)、(3β,5a,8a,22E)-5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3-ol(8)、stigmasta-7,2

6、2-diene-3β,5α,6α-triol(9)、3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6β-yl oleate(10)、Nb-acetyltryptamine(11)和2-(1-oxo-2-hydroxyethyl) furan(12)。
　　采用DPPH法對分離得到的12個單體化合物進行抗氧化活性初步評價。結果表明:這12個單體化合物均能在一定程度上清除DPPH自由基，但清除

7、能力相差較大。其中，化合物3和5清除DPPH自由基的能力最強，且與陽性對照VE的DPPH自由基清除活性最為接近。
　　采用8種指標菌對分離得到的單體化合物進行抑菌活性篩選，結果為:化合物6-10都表現(xiàn)出了不同程度的抑菌活性，其中化合物6表現(xiàn)出明顯的廣譜抑菌活性，能抑制白色念珠菌、產氣莢膜梭菌、恥構分枝桿菌以及草分枝桿菌的生長，MIC值分別為25.5±0.48、25.5±0.25、18.5±0.34和51.0±0.68μM?；衔?