細胞外信號調(diào)節(jié)激酶通路在香煙煙霧致肺血管重構(gòu)中的調(diào)控機制.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 細胞外信號調(diào)節(jié)激酶在吸煙伴或不伴有慢性阻塞性肺疾病患者肺血管中的表達及其與肺血管重塑的關(guān)系
　　目的:探討吸煙伴或不伴有慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者肺血管重塑中細胞外信號調(diào)節(jié)激酶( extracellular signal-regulated kinase, ERK)的表達及意義。
　　方法

2、:取48份(吸煙患 COPD組16例、吸煙不患 COPD組18例、不吸煙不患COPD組14例)手術(shù)切除的肺組織,HE染色觀察肺血管重塑;用Western blot檢測 ERK及cyclinD1在肺動脈的表達;實時熒光 RT-PCR檢測 cyclinD1 mRNA的表達。
　　結(jié)果:與非吸煙對照組比較,吸煙不伴 COPD組肺血管壁厚度和血管直徑比值(％WT)明顯增加,ERK及cyclinD1表達增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)

3、。吸煙不伴 COPD組與吸煙伴 COPD組相比較,肺血管壁厚度和血管直徑比值及ERK的表達差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:吸煙伴或不伴有 COPD患者肺動脈 ERK和cyclinD1的表達均較不吸煙者明顯升高,ERK的高表達可能與香煙煙霧導致的肺血管重構(gòu)有關(guān)。
　　第二部分 細胞外信號調(diào)節(jié)激酶參與香煙煙霧提取物促進人肺動脈平滑肌細胞增殖
　　目的:探討細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regu

4、lated kinase, ERK)在香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)所致人肺動脈平滑肌細胞(human pulmonary artery smooth muscle cells, HPASMCs)增殖中的作用。
　　方法:原代培養(yǎng)的HPASMCs予以 CSE干預(yù)。細胞隨機分為四組:正常對照組;5﹪CSE組;PD98059+5﹪CSE組;PD98059組。采用細胞計數(shù)及四甲基偶氮唑鹽比色法

5、(MTT)檢測細胞的增殖能力。流式細胞術(shù)檢測細胞周期的分布。用Western blot檢測 ERK及cyclinD1在 HPASMCs的表達。實時熒光 RT-PCR檢測cyclinD1 mRNA的表達。
　　結(jié)果:在5％CSE的刺激下,HPASMCs的ERK mRNA和蛋白水平均升高,并促進細胞增殖(P<0.01)。PD98059抑制5％CSE誘導的細胞增殖(P<0.01)。此外,PD98059明顯抑制cyclinD1的mRNA和

6、蛋白的表達,并導致細胞周期 G1期停滯,進而減少 HPASMCs的增殖(P<0.01)。
　　結(jié)論:ERK在 CSE誘導 HPASMCs增殖中發(fā)揮重要作用,其部分原因可能是其上調(diào) cyclinD1的表達。
　　第三部分 還原型輔酶Ⅱ氧化酶參與香煙煙霧提取物促進人肺動脈平滑肌細胞增殖
　　目的:探討還原型輔酶Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH)氧化酶在

7、香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)所致人肺動脈平滑肌細胞(human pulmonary artery smooth muscle cells, HPASMCs)增殖中的作用。
　　方法:原代培養(yǎng)的HPASMCs予以 CSE干預(yù)。細胞隨機分為四組:正常對照組;5﹪CSE組;apocynin+5﹪CSE組;apocynin組。采用細胞計數(shù)及四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測細胞的增殖能力。流式

8、細胞術(shù)檢測細胞周期的分布。用Western blot檢測 NADPH氧化酶亞基 p47phox及細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)在 HPASMCs的表達。實時熒光RT-PCR檢測 p47phox mRNA的表達。比色法檢測丙二醛(malondiadehyde, MDA)表達。
　　結(jié)果:在5％CSE的刺激下,HPASMCs中的p47phox以及ERK表達水平