急性腦梗死與HLA-DRB1基因多態(tài)性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：隨著生活水平的提高，腦血管疾病已成為目前人類疾病的三大死亡原因之一。腦梗死在腦血管疾病中占有重要的地位，其發(fā)生與環(huán)境、遺傳等多方面因素相關(guān)，目前許多證據(jù)表明遺傳因素和免疫因素在腦梗死的發(fā)病中有顯著作用。HLA基因復(fù)合體位于人第6號(hào)染色體短臂6P21.31，共有224的基因座位，占人體整個(gè)基因組1/3000，目前已發(fā)現(xiàn)HLA復(fù)合體等位基因總數(shù)達(dá)到1029個(gè)。HLA分子的主要功能是結(jié)合抗原提呈細(xì)胞(antigenprescnting

2、cells,APC)加工過的內(nèi)源或外源抗原肽并提呈給T細(xì)胞，參與自我識(shí)別、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和異體移植的排斥作用。目前HLA的應(yīng)用已從器官移植的組織配型檢測(cè)擴(kuò)展到與疾病的關(guān)聯(lián)、親子鑒定、免疫應(yīng)答、人類學(xué)、某些先天遺傳病的早期診斷及未來基因治療等領(lǐng)域。HLA系統(tǒng)與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，又是很好的遺傳標(biāo)記，所以腦梗死與HLA之間有無關(guān)聯(lián)引起了一些學(xué)者的興趣，免疫遺傳基因-HLA在急性腦梗死中的作用機(jī)制，以及他們之間關(guān)系的研究遼寧地區(qū)尚無報(bào)道。本文的目的是

3、研究HLA-DRBl的多態(tài)性，并尋找急性腦梗死的致病易感基因和保護(hù)基因，為急性腦梗死病的預(yù)防和早期診斷、早期治療提供科學(xué)依據(jù)。 方法：選取大連市友誼醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的大連籍患者，年齡46-88歲，全部病例診斷按照全國(guó)第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)確診，共計(jì)39例。均系無血緣關(guān)系的大連漢族成人，并除外糖尿病、原發(fā)高血壓和腦腫瘤患者作為病例組。隨機(jī)選取大連地區(qū)無償獻(xiàn)血志愿者99名，身體健康，體檢標(biāo)準(zhǔn)符合“全國(guó)采供血管理規(guī)范”。家族

4、無遺傳病史，年齡在18-55周歲，均無血緣關(guān)系作為對(duì)照組。留取病例組與對(duì)照組個(gè)體外周靜脈血3～5ml，DNA提取試劑盒提取DNA。HLA-DRB1的分型采用PCR-SSO方法，使用美國(guó)Onelambda公司開發(fā)的SSO分型試劑盒，配合Lumincx 100IS分析系統(tǒng)進(jìn)行全自動(dòng)化結(jié)果判讀和基因分析。在SSO技術(shù)基礎(chǔ)上采用流式細(xì)胞技術(shù)，將標(biāo)記有生物素的序列特異性引物，擴(kuò)增HLA等基因座位，擴(kuò)增產(chǎn)物與標(biāo)記熒光的寡核苷酸探針進(jìn)行雜交、沖洗后，

5、在Luminex100流式細(xì)胞儀上進(jìn)行判讀結(jié)果。當(dāng)擴(kuò)增的DNA片段與探針結(jié)合并發(fā)出熒光為陽(yáng)性，否則為陰性。對(duì)照組和病例組的HLA-DRBl的各等位基因的基因頻率和基因型頻率采用直接計(jì)數(shù)法。采用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，進(jìn)行X2檢驗(yàn)計(jì)算觀察組與對(duì)照組之間的差異P值，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。當(dāng)樣本數(shù)小于40或一個(gè)單元格的期望值小于5，使用Fisher精確檢驗(yàn)。計(jì)算和檢驗(yàn)病例組和對(duì)照組暴露的優(yōu)勢(shì)比并進(jìn)行檢驗(yàn)。 結(jié)果：1．等位基因和

6、基因型：本研究檢測(cè)了138人(病例組39人，對(duì)照組99人)的HLA-DRB1位點(diǎn)，病例組中檢測(cè)到HLA-DRB1等位基因11個(gè)，基因型27個(gè),其中病例組中出現(xiàn)頻率最高的是HLA-DRB1*04等位基因，等位基因頻率由高到低分別為HLA-DRB1*04(16.67％)，DRB1*07(14.1％)，DRB1*09(14.1％)，DRB1*15(14.1％)，DRB1*12(10.26％)，DRB1*13(10.26％)，DRB1*11(6

7、.41％)，DRB1*03(5.13％)，DRB1*14(5.13％)，DRB1*08(2.56％)和DRB1*01(1.28％)，病例組未檢測(cè)到HLA-DRB1*10和DRB1*16兩個(gè)等位基因；對(duì)照組中檢測(cè)到HLA-DRB1等位基因13個(gè)，基因型52個(gè)，其中對(duì)照組中出現(xiàn)頻率最高的是HLA-DRB1*15等位基因，等位基因頻率由高到低分別為HLA-DRB1*15(14％)，DRB1*12(13.5 ％)，DRB1*09(11％)，DR

8、B1*04(10.5％)，DRB1*14(10.5％)，DRB1*07(10％)，DRB1*08(9.5％)，DRB1*11(6％)，DRB1*03(3.5％)，DRB1*01(3％)，DRB1*13(3％)，DRB1*10(2％)和DRB1*10(2％)。2.基因頻率的比較：對(duì)比病例組和對(duì)照組的HLA-DRB1基因頻率，得到各位點(diǎn)的比較P值。HLA-DRB1*01，DRB1*03，DRB1*04，DRB1*07，DRB1*09 DRB

9、1*10，DRB1*11，DRB1*12，DRB1*14，DRB1*15及DRB1*16兩組間均沒有顯著性差異，而HLA-DRB1*08和DRB1*13病例組和對(duì)照組間有顯著性差異。3.相關(guān)檢驗(yàn)：病例組HLA-DRB1*13基因頻率(10.26％) 明顯高于對(duì)照組(3％)，P=0.038有顯著性差異。OR值等于4.1l，在發(fā)病率很低時(shí)，OR近似等于RR，所以相當(dāng)于RR值大于4，并OR值進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，等到卡方值為5．82，大于P=0.05

10、時(shí)的臨界值3.84，P<0.05，即HLA-DRB1*13基因與腦梗死有正相關(guān)性。病例組HLA-DRB1*08基因頻率(2.56％)低于對(duì)照組(9.5％)，P=0.049有顯著性差異。OR值等于0.24，并OR值進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，等到卡方值為14.53，大于P=0.05時(shí)的臨界值3.84，P<0.05，即HLA-DRB1*08基因與腦梗死有負(fù)相關(guān)性。 結(jié)論：HLA-DRB1*13可能是大連地區(qū)漢族成人急性腦梗死的發(fā)病的一個(gè)致病易感基